Šećerna juha i šećerni agar priprema se dodavanjem jednog ili drugog ugljikohidrata u količini od 0,5 do 1% običnoj juhi ili rastopljenom običnom agaru. Ugljikohidrati se rastvaraju u maloj količini vode, a zatim se dodaju u hranljivi medij. Sterilizacija šećerne juhe i agara vrši se u Koch aparatu 3 dana za redom po 1 sat.
Agar od krvi, seruma ili ascitične tečnosti pripremljeno u strogoj asepsi. Gotovom blago alkalnom agaru doda se 20-25% sterilnog seruma ili ascitične tekućine ili 5-25% sterilne defibrinirane krvi, otopi se i ponovo ohladi na 45°, sipa u epruvete ili bočice. Nakon temeljitog miješanja (izbjegavajte stvaranje mjehurića i pjene), agar u epruvetama se pokosi, a sadržaj bočica se sipa u Heidenreich posude. Juha sa serumom, ascitičnom tečnošću ili krvlju pripremljen na isti način kao agar, ali bez zagrijavanja. Za kontrolu sterilnosti, juha se stavlja u termostat na 48 sati na 37°.

Diferencijalno dijagnostičke hranljive podloge. Sastav i namjena.

Endo okruženje. Priprema se neposredno prije upotrebe. U 100 ml mesno-peptonskog agara ili Hottinger bujon agara (pH 7,6) sterilno dodati 1 g hemijski čiste laktoze rastvorene u 5 ml sterilne vode, ohladiti na 70° i dodati mešavinu od 0,5 ml zasićenog rastvora bazične kiseline. fuksina i 1,25 ml svježe pripremljenog 10% rastvora natrijum sulfida, promućkano i sipano u čaše. Za sušenje otvorene čaše se stavljaju u termostat na 37° na 30 minuta.

Na Endo mediju, E. coli stvara crvene kolonije s metalnom nijansom, a bakterije grupe tifus-paratifusa i dizenterije stvaraju bezbojne kolonije.

Raznovrstan niz ugljikohidrata (Hissov medij). U 100 ml vode dodajte 1 g peptona i 0,5 g kuhinjske soli. Pepton i sol se otapaju u vrućoj vodi nekoliko minuta i filtriraju kroz papirni filter (rastvor bi trebao biti potpuno bistar). Postavite pH na 7,0. 1% jednog od upotrijebljenih ugljikohidrata se otopi u navedenom mediju, plovci se spuštaju na dno epruveta da bi uhvatili plin (što ukazuje na duboku razgradnju šećera) i dodaje se indikator. Kao indikator se koristi sljedeće:

a) tinktura lakmusa - 5 ml na 100 ml podloge. U kiseloj sredini tinktura lakmusa pokazuje crvenilo, u alkalnoj postaje plava;

b) azolitmin, koji je prečišćeni lakmusov preparat, njegova kalijumova so (na 1 litar podloge dodaje se 0,25 g azolitmina);

c) bromothymol blau - na 1 litar podloge 1 ml 1,6% alkoholnog rastvora indikatora (medij postaje zelen, plavi kada se formira alkalija, žuti kada se formira kiselina);

d) Andrede indikator, koji se sastoji od 1 g kiselog fuksina, 400 ml destilovane vode i 64 ml normalnog rastvora natrijum hidroksida. 1% indikator se dodaje u hranljivu podlogu. Podloga u epruveti treba da dobije slamnato-žutu boju bez ružičaste nijanse. U kiseloj sredini, boja medija se mijenja u crvenu.

Indikator se dodaje kako bi se utvrdile promjene u reakciji hranljivog medija koje nastaju pod utjecajem fermentacije ugljikohidrata, odnosno da bi se utvrdila biohemijska aktivnost mikroba. Potonji ima velika vrijednost za mikrobiološku dijagnostiku niza zaraznih bolesti (tifusna groznica, dizenterija, kolera i dr.). Mediji sa ugljikohidratima i indikatorom se sipaju u sterilne epruvete i steriliziraju frakciono na 100° 3 dana.

Kratak šareni red. Promjene tokom rasta E. coli, S. typhi.

Metode za izolaciju čistih kultura aeroba.

Drigalski metod

Izolacija čiste kulture anaeroba.

Pogledajte praktične vještine

Virološke metode. Svrha, princip.

Virološka metoda

Glavne faze:

1. Prikupljanje materijala za testiranje.

2. Selekcija zasnovana na principu citotropizma i dobijanje osetljivog test sistema, utvrđivanje njegove održivosti.

3. Infekcija odabranog sistema.

4. Indikacija virusa na osnovu detekcije njegove nukleinske kiseline, antigena, hemaglutinina, CPD, inkluzija.

5. Identifikacija i titracija virusa se vrši na osnovu:

a) određivanje antigena virusa uz pomoć imunoloških reakcija (RIF, ELISA, RPGA, RSK, RN, VIEF, itd.); b) patohistološki pregled organa i tkiva; c) CPP; d) klinički simptomi, biološki testovi (keratokonjunktivalni, itd.).

Metode otkrivanja virusa

Kada su stanične kulture inficirane virusima, mogu se dobiti različite vidljive manifestacije djelovanja virusa:

1. Citopatsko djelovanje virusa na ćelijsku kulturu (CPE)– pojava vidljivih morfoloških degenerativnih promjena u njemu;

2. Sticanje sposobnosti inficirane ćelijske kulture da hemadsorpcija– na adsorpciju eritrocita na površini sloja ćelije;

3. Formiranje u inficiranoj ćelijskoj kulturi ispod gustog sloja posebnog agarnog omotača karakterističnih plakete, koji su “negativne kolonije” virusa;

4. Intracelularne inkluzije

Klasifikacija medija kulture:

Prirodno– sastoje se od proizvoda životinjskog ili biljnog porijekla i imaju neizvjestan hemijski sastav.

Na primjer: sokovi od povrća i voća, životinjska tkiva, krv, mlijeko, jaja, itd. (IPA, MPB). Polusintetički – sadrži poznata jedinjenja hemijske prirode

i supstance nesigurnog sastava. Na primjer: MPB sa glukozom, Endo medijum, Sabouraud medijum. Sintetički

– sadrže samo hemijski čista jedinjenja u preciznim koncentracijama. Koristi se u laboratorijskim eksperimentima. Na primjer: okruženje Chapeka, Omeljanskog, Ušinskog itd.

Namjena medija kulture Universal

(opće namjene) - pogodan za uzgoj mnogih vrsta mikroorganizama i koristi se kao osnova za posebne hranljive podloge. Primjeri: MPB, MPA, Hottingerova podloga, GRM, tioglikolatna podloga. Posebno

1. koristi se u slučajevima kada mikroorganizmi ne rastu na jednostavnim podlogama. Tu spadaju krvni, serumski agar, juha od surutke, ascitična juha, ascites agar i drugi. Izborna okruženja

- neki mikroorganizmi na njima rastu brže i intenzivnije od drugih vrsta bakterija. Na primjer, 1% alkalna peptonska voda je izborni medij za vibrio kolere, Roux i Lefflerov medij za patogene difterije. 2. Selektivno -

zahvaljujući selektivnim aditivima (žuč, boje, antibiotici itd.) u stanju su da potisnu razvoj nekih vrsta mikroorganizama, ali ne utiču na druge vrste. Primjeri: Müllerov medij je selektivan za tifus-paratifusne bakterije, furazolidon-tween agar je selektivan za korinebakterije i mikrokoke. Dodavanje antibiotika u podloge čini ih selektivnim za gljive (npr. Sabouraudov medij, itd.).- grupa medija koji omogućavaju određivanje biohemijskih svojstava mikroorganizama i njihovo razlikovanje. Dijele se na podloge za određivanje proteolitičkih, peptolitičkih, saharolitičkih, hemolitičkih, lipolitičkih i redukcijskih svojstava (Endo, Levin, Ploskirev, Gissa medij).

4. Konzervans (transport) -

dizajniran da sačuva vitalnost mikroorganizama od trenutka sakupljanja

biomaterijala prije sjetve za dijagnostiku

Tečnost(čorbe) – proučavanje fizioloških i biohemijskih karakteristika i akumulacije biomase mikroorganizama

Polutečno(1% agar) – skladištenje kultura i uzgoj anaeroba

Gusto(3-5% agar) – izolacija čistih kultura, akumulacija, kvantitativno snimanje, proučavanje kulturnih svojstava, antagonistički odnosi

Bulk– skladištenje sjemena u industriji (proso, mekinje)

Osušite– proizvodi industrija za pripremu hranljivih podloga

Transportni sistem sa Stuart okruženjem

Stewartov medij je polučvrsti, nutrijentima siromašan supstrat za očuvanje i transport širokog spektra patogenih mikroorganizama, kao npr. Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Corynebacterium diphteriae, Trichomonas vaginalis, Streptococcus sp., Salmonella sp., Shigella sp. itd. Najzahtjevniji mikroorganizmi u ovoj sredini opstaju duže od jednog dana, drugi do nekoliko dana.

Prisutnost tioglikolata u mediju potiskuje enzimsku aktivnost bakterija, a nedostatak dušika onemogućuje njihovu reprodukciju.

Transportni sistem sa okruženjem Keri Blair

Transportni medij Keri Blair je modifikacija Stewartovog osnovnog transportnog medija dizajniranog posebno za fekalne uzorke.

Glicerofosfat, koji je metabolit nekih enterobakterija ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, itd.), zamijenjen anorganskim fosfatom,

Metilensko plavo je uklonjeno i pH medijuma je povećan na 8,4.

Podloga Keri Blair omogućava očuvanje većine patogena, uključujući i zahtjevne mikroorganizme kao što su Neisseria sp., Haemophilus sp., Streptococcus sp..

Ovaj medij je standardan za transport anaeroba.

Transportni sistem sa Ames okruženjem

Ames transportni medij je još jedna modifikacija osnovnog Stewartovog transportnog medija, u kojem je glicerofosfat zamijenjen anorganskim fosfatom, budući da je glicerofosfat metabolit nekih enterobakterija ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, itd.) i može podržati rast nekih gram-negativnih mikroorganizama.

Metilensko plavo je zamijenjeno aktivnim ugljenom farmaceutske kvalitete.

Kalcij i magnezij su dodani mediju kako bi se održala propusnost bakterijskih stanica.

Ovo okruženje je sposobno da podrži mikroorganizme kao npr Neisseria sp., Haemophilus sp., Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceae itd., međutim, najbolji rezultati se postižu uzgojem u prva 24 sata.

Univerzalni medij za obogaćivanje: mesni pepton agar (MPA) i mesni pepton bujon (MPB)

Oni su glavni medij za inokulaciju mikroorganizama za provjeru čistoće kultura prije biohemijske i serotipizacije.

Koriste se za uzgoj i prebrojavanje nepretencioznih mikroorganizama. U polutečnom obliku, medij se može koristiti za skladištenje kontrolnih (referentnih) mikroorganizama.

Univerzalna okruženja za skladištenje Hottinger okruženje

Dizajniran za uzgoj različitih mikroorganizama, kao što su enterobakterije, Pseudomonas aeruginosa, stafilokoki i neke vrste streptokoka. Po potrebi se može obogatiti ugljikohidratima i solima.

Sadrži Hottingerov hidrolizat koji se dobija enzimskom hidrolizom mlevenog mesa (goveđeg) sa pankreatinom, nakon čega sledi filtriranje i dodavanje hloroforma kao konzervansa.

Univerzalna okruženja za skladištenje:Mueller-Hinton okruženje

Ovaj medij se koristi za uzgoj Neisseria sp. te određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antimikrobna sredstva.

Wednesday McConkey

MacConkey mediji se preporučuju kao diferencijalni mediji za selektivnu izolaciju enterobakterija i srodnih gram-negativnih bacila.

Laktoza pozitivni sojevi rastu s ružičastim ili crvenim kolonijama koje mogu biti okružene zonom precipitacije žučne soli.

Crvena boja nastaje kao rezultat zakiseljavanja medija produktima raspadanja laktoze (kada pH padne ispod 6,8) i adsorpcije neutralne crvene boje.

Sojevi koji ne fermentiraju laktozu (Shigella, Salmonella) obično formiraju prozirne, bezbojne kolonije i ne mijenjaju okolinu.

Diferencijalna dijagnostička okruženja:Endo medium

Ovaj medij je razvio Endo kao medij kulture za diferencijaciju fermentirajućih i nefermentirajućih mikroorganizama laktoze. Koristi se za mikrobiološka ispitivanja vode, otpadnih voda, mliječnih i drugih prehrambenih proizvoda.

Natrijum sulfit i bazični fuksin imaju inhibitorni efekat na gram-pozitivne mikroorganizme. Laktozu razlažu mikroorganizmi do aldehida i kiseline.

Diferencijalna dijagnostička okruženja:Aldehid, zauzvrat, oslobađa fuksin iz fuksin-sulfitnog kompleksa, pojačavajući crvenu boju kolonija.

Kod E. coli ova reakcija je veoma izražena i praćena je kristalizacijom fuksina, što se manifestuje zelenkastim metalnim sjajem (muchsin sjaj) kolonija.

Agar sa žumancetom

Ovaj medij se koristi kao selektivni medij za izolaciju klinički značajnih stafilokoknih kultura.

Diferencijalna dijagnostička okruženja:Manitol je supstrat koji se može fermentirati i diferencirati, kao i izvor ugljika.

Dodatak (do 5% v/v) emulzije žumanca omogućava određivanje aktivnosti lipaze mikroorganizama. Emulzija u fiziološkom okruženju postaje prozirna, pa se u prisustvu aktivnosti lipaze oko kolonija formira žuta neprozirna zona.

Wilson-Blair ili bizmut sulfitni agar

Selektivni medij za izolaciju salmonele.

Peptička probava životinjskog tkiva i ekstrakt mesa služe kao izvor azotnih nutrijenata, ugljika, sumpora, vitamina B i elemenata u tragovima neophodnih za rast ovih bakterija.

Briljantno zeleno inhibira rast svih gram-pozitivnih bakterija. Glukoza je ugljikohidrat koji se može fermentirati.

Željezni sulfat može otkriti proizvodnju sumporovodika.Bizmut je teški metal koji inhibira rast većine gram-negativnih crijevnih bakterija osim salmonele.

Salmonele reduciraju željezni sulfat u prisustvu glukoze i bizmut sulfita u željezni sulfid, koji njihove kolonije pretvara u crnu boju. Posebna izborna okruženja: Loefflerovo okruženje

Ovaj medij sa dodatkom konjskog seruma koristi se za uzgoj

Corynebacterium diphtheriaeiz kliničkog materijala i subkultura čistih kultura ovih mikroorganizama.

Visoka koncentracija u serumu pomaže u određivanju proteolitičke aktivnosti mikroorganizama, kao i stvaranja pigmenta.

Pepton i mesni ekstrakt daju mikroorganizmima esencijalne nutrijente. Glukoza je supstrat koji se može fermentirati i izvor energije. Campylobacter fetus ssp. jejuni.

Prisustvo amfotericina B u suplementu značajno ili potpuno potiskuje rast gljivica, kasnije uveden, pojačava supresiju normalne crijevne mikroflore.

Kolonije Campylobacter fetus ssp. jejuni imaju sluzav karakter, ravno sivi sa nepravilnim obrisima ili uzdignuti, okrugli, bez hemolize.

Neki sojevi mogu proizvesti žuto-smeđe ili ružičaste kolonije.

Na vlažnoj površini podloge može doći do spajanja rasta ili rojenja.

Izborne medije u mikrobiološku praksu uveli su S.N. Vinogradsky i M. Beyerinck. To su hranjive podloge u koje se dodavanjem jednog ili više hemijska jedinjenja, stvaraju se optimalni uslovi za rast i razmnožavanje jedne vrste mikroorganizama (ili grupe srodnih mikroorganizama), a nepovoljni uslovi za sve ostale. Takve podloge se uglavnom koriste za izolaciju čiste kulture mikroorganizama iz njihovih prirodnih staništa i za akumulaciju mase kultura (hemijska metoda za izolaciju čiste kulture). Na primjer, hranljiva podloga, a to je koagulirani konjski serum, je selektivna podloga za bakterije difterije, alkalna peptonska voda za Vibrio cholerae, žučna juha za uzročnika trbušnog tifusa, jetrena juha za Brucella itd.

Akumulacija mikroba u selektivnim hranjivim podlogama u mnogim slučajevima služi kao važan preliminarni korak u izolaciji čistih kultura iz originalnih test materijala (na primjer, Vibrio cholerae ili tifusnih bakterija iz fecesa pacijenata ili nositelja, itd.).

Šta podrazumijevate pod diferencijalnim hranljivim medijima?

Diferencijalni dijagnostički mediji su oni mediji koji, pored tvari koje osiguravaju rast i razvoj mikroorganizama, uključuju tvari koje se koriste kao supstrat za određene enzime. Na osnovu kvalitativne promjene u supstratu utvrđuje se prisustvo određenog enzima (procjenjuje se pomoću indikatora koji reaguje na prisustvo produkata raspadanja supstrata u hranljivom mediju).

Svaki tip mikroorganizma karakterizira prilično stabilan skup enzima. Određivanje skupa enzima pomoću diferencijalno dijagnostičkih medija omogućava razlikovanje vrsta mikroorganizama. Na primjer, krvni agar vam omogućava da otkrijete enzim hemolizin, His medij - saharolitičke enzime (ugljikohidrate), želatin se koristi za uzimanje u obzir proteolitičkih svojstava mikroba itd.

Krvni agar. Prisutnost enzima hemolizina procjenjuje se uništavanjem crvenih krvnih stanica i formiranjem svjetlosne zone oko mikroba uzgojenih na krvnom agaru.

Njegovi mediji. Prisustvo enzima - karbohidrata, koji razgrađuju ugljikohidrate u kiselinu, ukazuje se promjenom pH podloge prema kiseloj strani i promjenom boje hranljive podloge. Razlika u setu enzima može se koristiti za provjeru čistoće izolirane kulture, kao i za brzo razlikovanje jedne vrste od drugih tokom početnog proučavanja inokulacije infektivnog materijala.

Hemijski reagensi

1. Šta su hemijski reagensi i za šta se koriste?

Hemijski reagensi- supstance koje se koriste u laboratorijskoj praksi za izvođenje različitih hemijskih reakcija.

U većini slučajeva kemijski reagensi su pojedinačne tvari, ali često imaju složen sastav. Ne postoji opšteprihvaćena klasifikacija hemijskih reagensa, najčešće se dele na analitičke hemijske reagense i sve ostalo.

2. U koje svrhe se koriste u veterinarskoj medicini?

U veterinarskoj medicini hemijski reagensi se koriste u analitičke i dijagnostičke svrhe u kliničkim, veterinarsko-sanitarnim, higijenskim, stručnim, biohemijskim i drugim laboratorijskim studijama. Metode istraživanja koje se koriste i razvijaju u biološkoj i kliničkoj praksi zahtijevaju širok spektar hemijskih reagensa koji moraju zadovoljiti širok spektar zahtjeva. Na primjer, kliničke i biohemijske studije zahtijevaju visoko pročišćene supstrate za enzime, same enzime, reagense za specifične grupe (SH, NH3, COOH grupe, itd.) itd. Za izvođenje neorganskih i organskih sinteza, kao i za kvalitativne i kvantitativne analize, uklj. za veterinarsko-sanitarnu kontrolu u raznim industrijama, analizu) lijekova, pri obavljanju veterinarskih, sanitarnih i higijenskih analiza prehrambenih proizvoda, zraka, vode i dr. veliki brojširok izbor hemijskih reagensa visok stepenčišćenje.

1.Po sastavu hranljive podloge se dele na jednostavno i složeno

Postoji grupa okruženja opšte namene - jednostavna. U ovu grupu spadaju mesno-peptonski bujon (jednostavna hranljiva juha), mesno-peptonski agar (jednostavan hranljivi agar), hranljivi želatin. Ovi mediji se koriste za uzgoj mnogih patogenih mikroba. Podloge opšte namene, ili jednostavne hranljive podloge, obično se pripremaju od hidrolizata uz dodatak peptona i natrijum hlorida. Koriste se i kao osnova za pripremu složenih medija.

Također, prema svom sastavu razlikuju se proteinski, bez proteinski i mineralni mediji.

2. Po poreklu okruženja se dijele na umjetno i prirodno (prirodno).

Prirodni hranljivi mediji mogu sadržavati komponente životinjskog (na primjer, krv, serum, žuč) ili biljnog (na primjer, komadići povrća i voća) porijekla.

3.Prema namjeni dodijeliti sredstva za konzerviranje(za primarnu sjetvu i transport), okruženje za obogaćivanje(za nakupljanje određene grupe bakterija), mediji kulture(univerzalni jednostavni, složeni specijalni i za stvaranje toksina), mediji za izolaciju i akumulaciju (konzervans, obogaćivanje i selektivni) i okruženje za identifikaciju(diferencijalno i elektivno-diferencijalno).

Mediji za kulturu konzervansa sprječavaju smrt patogena i potiskuju rast saprofita. Najviše se koriste mješavina glicerina, hipertonični rastvor, glicerinski konzervans sa LiCl 2, rastvor natrijum citrata i natrijum deoksiholat.

Medij za obogaćivanje bakterija

Mediji za obogaćivanje(npr. Kitta-Tarozzi medij, selenit bujon, tioglikolatni medij) se koriste za akumulaciju određene grupe bakterija stvaranjem uslova koji su optimalni za neke vrste, a nepovoljni za druge. Najčešće, razne boje i hemikalije- žučne soli, Na+ tetrationat, K telurit, antibiotici, fuksin, gentian violet, briljantno zeleno itd.

Također po dogovoru razliku između okruženja elektivna, specijalna i diferencijalna dijagnostika.

Elektivna okruženja (selektivna, selektivna, akumulacija, obogaćivanje). Princip stvaranja selektivnih hranljivih podloga zasniva se na zadovoljavanju osnovnih biohemijskih i energetskih potreba vrste mikroba za koju su namenjene za uzgoj, odnosno na dodavanju inhibitora koji suzbijaju rast prateće mikroflore. Određeni sastav i koncentracija hranljivih materija, mikroelemenata, faktora rasta pri strogo definisanoj pH vrednosti ili dodatkom inhibitora obezbeđuju optimalne uslove za uzgoj jedne ili više vrsta mikroorganizama. Kada se na njih sije materijal koji sadrži mješavinu različitih mikroba, prvo će se pojaviti rast vrsta za koje će okruženje biti selektivno. Primjeri elektivnih medija su žučna juha, selenitna juha, Ploskirev medij - za uzgoj mikroba iz intestinalne porodice, alkalna peptonska voda - za Vibrio cholerae.

Žučni bujon. MPB se dodaje 10-20% volovske žuči. Žuč inhibira rast koka i zračne flore, ali je povoljna za proliferaciju salmonele.

Selenit bujon. Sastoji se od fosfatne juhe sa dodatkom natrijeve soli selenita, koja je inhibitor rasta kokalne flore i Escherichia coli, ali ne inhibira rast salmonele.

srijeda Ploskireva. Gusti medij koji sadrži inhibitore E. coli, coli, ali je povoljan za rast Shigella i Salmonella, čiju reprodukciju ne inhibiraju briljantna zelena i žučne soli.

Peptonska voda. Sadrži 1% peptona i 0,5% natrijum hlorida. Okolina je selektivna za Vibrio cholerae, jer umnožavaju se bolje od drugih bakterija u "gladnim sredinama", posebno u alkalnoj reakciji, jer same luče kisele otpadne produkte.

Posebna okruženja. Neophodan za uzgoj bakterija koje ne rastu na jednostavnim hranjivim podlogama. Za neke organizme potrebno je dodati ugljikohidrate, krv i druge dodatne hranjive tvari u jednostavne hranljive podloge. Primjeri jednostavnih hranljivih podloga su šećerna juha i šećerni agar za streptokoke (pripremljeni od MPB i MPA, u koje se dodaje 0,5-2% glukoze).

Diferencijalna dijagnostička okruženja koristi se za određivanje vrste mikroba koji se proučava, na osnovu karakteristika njegovog metabolizma. Prema svojoj namjeni, diferencijalno dijagnostička okruženja se dijele na sljedeći način:

1. Mediji za detekciju proteolitička sposobnost mikrobi koji sadrže mlijeko, želatin, krv itd.

2. Mediji sa ugljikohidratima i polihidričnim alkoholima za detekciju raznih saharolitički enzimi.

Sljedeći indikatori se dodaju u sastav diferencijalnih dijagnostičkih medija dizajniranih za identifikaciju saharolitičkih svojstava i redoks enzima: neutralna crvena, kiseli fuksin, bromotimol plava, vodena plava sa rozolnom kiselinom (BP). Promjenom svoje boje pri različitim pH vrijednostima, indikator ukazuje na prisustvo enzima i razgradnju sastojka unesenog u podlogu.

Primjeri diferencijalno dijagnostičkih okruženja:

Endo medium. Sastoji se od MPA sa dodatkom 1% laktoze i bazičnog fuksina (indikatora) obezbojenog natrijum sulfitom. Endo medij ima blago ružičastu boju. Koristi se u dijagnozi crijevnih infekcija za razlikovanje bakterija koje razgrađuju laktozu i formiraju kisele produkte od bakterija koje nemaju tu sposobnost. Kolonije mikroba pozitivnih na laktozu (Escherichia coli) su crvene zbog smanjenja fuksina. Kolonije laktoza-negativnih mikroorganizama - salmonele, šigele, itd. - su bezbojne.

Diferencijalna dijagnostička okruženja uključuju kratka i proširena šareni red. Sastoji se od medijuma sa ugljenim hidratima (Hiss media), MPB, mleka i mesno-peptonskog želatina.

Hiss media pripremaju se na bazi peptonske vode u koju se dodaju hemijski čisti mono-, di- ili polisaharidi (glukoza, laktoza, skrob itd.).

Za detekciju pH pomaka kao rezultat stvaranja kiselina i razgradnje ugljikohidrata, u mediju se dodaje indikator. Dubljom razgradnjom ugljikohidrata nastaju plinoviti produkti (CO 2, CH 4 itd.) koji se hvataju plovcima - malim epruvetama spuštenim naopako u medij. Podloge sa ugljikohidratima mogu se pripremiti i kao guste podloge uz dodatak 0,5-1% agar-agara. Tada se detektuje formiranje gasa formiranjem mjehurića (pukotina) u stupcu medija.

Na MPB, koji je dio šarolike serije, pronađeni su proizvodi koji nastaju razgradnjom aminokiselina i peptona (indol, sumporovodik). Vodonik sulfid detektuje se stavljanjem trake filter papira namočenog u rastvor olovnog acetata u MPB nakon sjetve kulture. Kada se aminokiseline koje sadrže sumpor razgrađuju, oslobađa se sumporovodik, a papir postaje crn zbog stvaranja olovnog sulfida. Odrediti indol možete koristiti složeni indikator. Indol nastaje razgradnjom triptofana i može se otkriti kada se ovaj indikator doda kulturi uzgojenoj na MPB. U prisustvu indola, MPB postaje zelen ili plav.

U praktičnim bakteriološkim laboratorijama imaju široku primjenu mikro i ekspres metode za indikativno proučavanje biohemijskih svojstava mikroorganizama. Postoji mnogo sistema za testiranje za ovu svrhu. Najčešći sistem indikatorskih papira (SIB). SIB su diskovi od filter papira impregnirani rastvorima šećera ili drugih supstrata u kombinaciji sa indikatorima. Takvi diskovi se spuštaju u epruvetu s kulturom uzgojenom u tekućem hranjivom mediju. O radu enzima sudi se po promjeni boje diska sa supstratom. Mikrotest sistemi za proučavanje identifikacije enterobakterija predstavljeni su plastičnim posudama za jednokratnu upotrebu sa medijima koji sadrže različite supstrate uz dodatak indikatora. Posijavanje čiste kulture mikroorganizama u takve test sisteme omogućava vam da brzo identifikujete sposobnost bakterija da iskoriste citrate, glukozu, saharozu, oslobađaju amonijak, indol, razlažu ureu, lizin, fenilalanin itd.

SPECIJALNI (IZBORNI) MEDIJI PREHRANE

Mediji za rast kvasca

Synthetic Reader Medium

Sastav medijuma uključuje, g/l: amonijum sulfat 3, magnezijum sulfat 0,7, kalcijum nitrat 0,04, natrijum hlorid 0,5, kalijum dihidrogen fosfat 1,0, kalijum hidrogen fosfat 0,1. Početni pH 6,6. Kalcijum nitrat, koji ne koristi kvasac, može se izostaviti iz medijuma. Za proučavanje reprodukcije kvasca dodajte 2% šećera, za proučavanje fermentacije - 5-10%. Kompletna sintetička podloga sadrži kristalne vitamine, mcg/ml: inozitol 5, biotin 0,0001, pantotenska kiselina 0,25, tiamin 1,0, piridoksin 0,25, nikotinska kiselina 0,5. Sterilizujte medijum u autoklavu pod pritiskom od 0,1 M Pa 20 minuta.

Glukozno-amonijum medij

Sadrži u 1 litru vode iz slavine sledeće supstance, g: amonijum sulfat 5, kalijum dihidrogen fosfat 0,85, kalijum hidrogen fosfat 0,15, magnezijum sulfat 0,5, natrijum hlorid 0,1, kalcijum hlorid 0,1, glukoza 20, agar 20. Za obogaćivanje sa 2 faktora rasta ili 0% 0,3%) ekstrakt i sok od grožđa.

Sintetički medij za identifikaciju nesavršenih kvasaca

Sadrži u 1 litru vode iz slavine sledeće supstance, g/l: glukoza 50, lizin 3, kalijum dihidrogen fosfat 1, magnezijum sulfat 1, gvožđe sulfat - u tragovima. Svaka komponenta se posebno rastvara u vodi i dodaje navedenim redosledom. U podlogu se dodaje agar (1,5%), topi se, sipa u epruvete i steriliše 20 minuta pod pritiskom od 0,05 MPa.

Kompletan medij sa lizinom za detekciju nesavršenih kvasaca

Sadrži u 1 litru vode iz slavine sledeće supstance, g/l: glukoza 50, magnezijum sulfat 1, kalijum dihidrogen fosfat 2, kalijum laktat 12 ml (50% rastvor), /, (+) lizin monohidrat 1, rastvor vitamina (po U 100 ml sterilne destilovane vode dodati, g: inozitol 2, kalcijum pantotenat 0,4, nikotinamid 0,1, agar 20 pH medijuma - 5-5,2 Medijum se sipa u epruvete od 15 ml i steriliše se 15 minuta pritisak od 0,1 MPa.

Acetatni medij za detekciju nesavršenih kvasaca

Za 1 litar vode iz slavine uzeti 10 g natrijum acetata, 10 g amonijum hlorida, 5 g glukoze, 3 ml autolizata kvasca, sipati u epruvete od 5 ml i sterilisati pod pritiskom od 0,05 MPa 30 minuta.

Medij za identifikaciju stranih kvasaca morfološki sličan glavnoj kulturi

10 g peptona, 2 g kalijum hidrogen fosfata se rastvori u 500 ml destilovane vode i filtrira. U filtratu otopiti 15 g agara, dodati 10 g glukoze, 0,4 g eozina i 0,065 ml metilenskog plavog (90% rastvor alkohola), dovesti do 1000 ml vrelom destilovanom vodom, sipati u epruvete i sterilisati 15 minuta. pri pritisku od 0,1 MPa. Kada se steriliše, boja nestaje kada se ohladi, ponovo se pojavljuje. Medij se čuva ne duže od 2 mjeseca.

Medij za formiranje pseudomicelija

Glukoza pepton agar. U 1 litar vode iz česme dodati, g: pepton 10, glukoza 20, agar 30-35. Sterilizirati 30 minuta pod pritiskom od 0,05 MPa. Po potrebi možete dodati kvasac ili ekstrakt mesa (0,5%) ili kuhati u tečnom obliku.

Krompir agar. 100 g oguljenog, opranog, tanko isječenog krompira naliti na hladnom mjestu nekoliko sati sa 300 ml vode iz slavine. Ekstrakt se filtrira, 230 ml ekstrakta dovede do 1 litre sa vodom iz slavine, doda se 20 g glukoze i 30-35 g agara, otopi se i steriliše 1 sat pod pritiskom od 0,075 MPa.

Voda s kvascem s ugljikohidratima („serija boja“)

Sposobnost kvasca da izazove fermentaciju ugljikohidrata utvrđuje se korištenjem vode kvasca sa 2% ispitivanog šećera (glukoza, maltoza, saharoza, laktoza, rafinoza itd.). Medij se sipa u epruvete sa plovcima, Dunbar-ove epruvete i steriliše parom frakciono strujom. Rezultati nakon sjetve se bilježe nakon 2 dana, po potrebi nakon 7 dana uzgoja na temperaturi od 30 °C.

Sposobnost kvasca da metaboliše ugljene hidrate oksidacijom proučava se na medijumu sledećeg sastava, r/l: amonijum sulfat 5, kalijum dihidrogen fosfat 1, magnezijum sulfat 0,5, autolitat 1, test šećer 10, agar 20. Podloga se sipa u epruvete, sterilisane 30 minuta pod pritiskom 0,05 MPa, pripremiti kosi agar. Rast kulture se procjenjuje nakon 3-4 dana.

Agar sa kvascem sa šećerom

0,5% natrijum hlorida, 1% glukoze (ili 4 ili 10% saharoze) i 2% agar se rastvore u vodi sa kvascem, pH 6,8 (sa glukozom) i 6-6,5 (sa saharozom). Medij se sipa u epruvete ili tikvice i steriliše pod pritiskom od 0,05 MPa 30 minuta.

Antibiotski mediji

Za preferencijalni razvoj kvasca i suzbijanje pratećih bakterija u medije se uvode antibiotici širokog spektra: streptomicin (100 jedinica/ml), penicilin (20-100 jedinica/ml), levomicin (50 mg/l), neomicin ( 20 jedinica/ml) i sl. Mogu se dodati u okolinu zajedno ili odvojeno.

Podloga za formiranje askospora

srijeda Gorodkova. Sadrži u 1 litru vode iz slavine, g: pepton 10, natrijum hlorid 5, glukoza 1 (ili 2,5), agar 20; pH okoline je 7,3. Sipati u epruvete i sterilisati 15 minuta pod pritiskom od 0,1 MPa.

McClary acetat agar. U 1 litar destilovane vode dodati g: natrijum acetat 8,2, kalijum hlorid 1,8, glukozu 1, ekstrakt kvasca 2,5, agar 15. Autoklavirati 15 minuta pod pritiskom od 0,1 MPa.

Wednesday Starkey. U 1 litru vode iz slavine rastvoriti g: kalijum hidrogen fosfat 1, kalijum dihidrogen fosfat 0,25, magnezijum sulfat 0,25, kalcijum hlorid 0,05, agar 20. Sterilisati pod pritiskom od 0,05 MPa 15 minuta.

Osmofilni medij za rast kvasca

U 1 litar glukoznog sirupa (50-60% DM) dodati 5 g peptona i 20 g agara. Pepton se može zamijeniti vodom s kvascem (50 ml). Sterilizirati pod pritiskom od 0,05 MPa.

Melasna sladovina

200-300 g guste melase pomiješa se s vodom u omjeru 1:3, zagrije se na temperaturu od 95°C i ostavi da stoji 2 sata. U rastvor se dodaje 3% diamonijum fosfata, razblaži vodom do 5-8% DM i sipa u epruvete ili tikvice. Za pripremu agar podloge dodajte 1,5-2% agara. Sterilizirati pod pritiskom od 0,05 MPa 30 minuta u autoklavu ili frakciono 1 sat sa intervalom od 20-24 sata 3 puta.

Podloga za uzgoj filamentoznih gljiva

Agar od repe

Dobro opranu šećernu repu isečemo na kriške, zalijemo vodom iz slavine (20 g repe na 1 litar vode) i kuhamo 30 minuta. Filtrat se dovede do prvobitne zapremine vodom, doda se 2% agar i steriliše pod pritiskom od 0,1 MPa 30 minuta.

Rezana pulpa

Čista repa se melje na rende, stavlja u Petrijeve posude i, bez prevrtanja, steriliše pod pritiskom od 0,1 MPa 30 minuta.

srijeda Capek

Sastav podloge, g/l: saharoza ili glukoza 30, kalijum dihidrogen fosfat 1,0, natrijum nitrat 2,0, magnezijum sulfat 0,5, kalijum hlorid 0,05, gvožđe sulfat 0,1, agar 20. Uzorak agara se prethodno izluži i doda rastvorene u 1 litru destilovane vode, zagrevaju se tekućom parom, a pH se podešava na 4,0-5,5 sa 10% rastvorom limunske kiseline ili natrijum hidroksida. Filtrirajte, sipajte u epruvete i sterilizirajte parom 3 puta po 30 minuta u razmaku od 1 dana.

Czapek-Dox šećerni nitratni agar

Opcija 1. Za 1 litar destilovane vode uzeti, g: saharoza 20, kalijum hidrogen fosfat 0,5, magnezijum sulfat 0,5, natrijum hlorid 0,5, kalijum nitrat 1, tragovi gvožđe sulfata, kalcijum karbonat 2-5, agar 20.

Opcija 2. Za 1 litar destilovane vode uzeti, g/l: saharozu 30, amonijum nitrat 2,5, kalijum dihidrogen fosfat 1, magnezijum sulfat 1, željezni sulfat 0,01, agar 20.

Glukozno-škrobni medij

Isti sastojci soli kao u Czapekovom saharoza nitrat agaru, ali umjesto saharoze uzima se 25 g rastvorljivog škroba i 5 g glukoze.

Skrobni amonijum agar

Sastav medijuma, g/l: rastvorljivi skrob 10, kalcijum karbonat 3, kalijum hidrogen fosfat 1, magnezijum sulfat 1, natrijum hlorid 1, amonijum sulfat 1, agar 20. Sterilisati 30 minuta pod pritiskom od 0,05 MPa.

Srijeda Saburo

U 100 ml sterilne vode sa kvascem dodati, g: pepton 5, glukozu 4, agar 1,8-2. Sterilizirati 20 minuta pod pritiskom od 0,05 MPa ili frakciono.

Osnova ovog medijuma je voda sa kvascem. Za pripremu kvasne vode 70-100 g svježeg presovanog kvasca (7-10 g suhog) kuha se 20-30 minuta u 1 litru destilovane vode i ostavi u visokom cilindru na hladnom 12 sati tečnost se dekantuje, dodaje se još 1 l vode, kuva 30 minuta, filtrira se, podesi pH na potrebnu vrednost. Pripremljeni medijum se steriliše u koracima od 2-3 minuta po 20 minuta sa razmakom od 1 dana. U 100 ml sterilne vode sa kvascem dodati 1% peptona, 2% agara, nakon rastvaranja agara dodati 4% glukoze ili maltoze, filtrirati, sipati u epruvete i sterilisati pod pritiskom od 0,05 MPa 20 minuta.

Medij se takođe može pripremiti upotrebom obične 1% peptonske vode.

Podloga za uzgoj bakterija mliječne kiseline

Hidrolizovano mleko (prema Bogdanovu)

Obično ili obrano mlijeko (pH 7,6-7,8) kuha se 5 minuta, posuda se dobro promućka i ohladi na temperaturu od 45°C i dodaje se 0,5-1 g pankreatina na 1 litar, nakon 4-7 min doda se 5 ml hloroforma. Stavite u termostat 18-20 sati na temperaturi od 40 °C. Pankreatin u prahu treba prethodno razrijediti u maloj količini tople vode. Tokom prvih sati mlijeko se miješa više puta sa otvorenim čepom. Hidrolizovano mleko se filtrira kroz papirni filter, razblaži 2-3 puta vodom, pH se postavi na 7,0-7,2 i steriliše 15 minuta pod pritiskom od 0,1 MPa ili 20 minuta pod pritiskom od 0,05 MPa.

Hidrolizovani mlečni agar

U hidrolizovano mleko dodaje se 1,5-2,0% agara. Smjesa se zagrijava do ključanja i drži dok se agar potpuno ne otopi. Vrući medijum se filtrira kroz pamučni filter, sipa u epruvete ili tikvice i steriliše pod pritiskom od 0,1 MPa 10-15 minuta.

Obrano mleko sa indikatorom

Svježe obrano mlijeko zagrijano do ključanja nijansira se vruće tinkturom lakmusa u intenzivnu lila boju. Sterilizirajte tekućom parom (3 puta po 30 minuta u razmaku od 1 dana) ili autoklaviranjem 10 minuta pod pritiskom od 0,1 MPa.

Sladna sladovina sa istrošenim zrnom

Slad se priprema, ali bez odvajanja istrošenog zrna (12-15% DM). Sipati u epruvete, dodati sterilnu kredu (2-4%) i sterilisati pod pritiskom od 0,05 MPa 30 minuta.

Saharoza sa kvascem

Za identifikaciju Lactobacillus I Leuconostoc koristiti podlogu pripremljenu na bazi vode sa kvascem sa dodatkom 0,5% natrijum hlorida, 10% saharoze i 2% agara; pH okoline je 6-6,5.

Medij za klijanje

25 g klica slada (ječma) kuha se 10 minuta sa 500 ml vode i nakon hlađenja na temperaturu od 45-50°C procijedi kroz platnenu vrećicu, pročišćava umućenim pilećim proteinima, ponovo prokuva i filtrira kroz papirni filter za uklanjanje koaguliranih proteina. U rastvor se dodaje 1,5% peptona, 2% šećera, 2% agara i steriliše se 30 minuta pod pritiskom od 0,05 MPa.

Kupus srijeda

200 g nasjeckanog bijelog kupusa prelije se sa 1 litrom vode, kuha se 10 minuta, protisne kroz dva sloja gaze. Dobivena tečnost se filtrira kroz presavijeni filter, razblaži 2 puta i uvarak se doda 2% glukoze i 1% peptona i steriliše pod pritiskom od 0,05 MPa 15 minuta. Da biste dobili čvrstu podlogu, dodajte 2% agar.

MRS medij (de Manov medij)

Sastav medijuma uključuje, g/l: mangan sulfat 0,05, magnezijum sulfat 0,2, kalijum hidrogen fosfat 2, amonijum nitrat 2, natrijum acetat 5, pepton 10, ekstrakt kvasca Difko 5, ekstrakt mesa 10, glukoza 20, tween 1 ml, medij pH 6-6,5. Medij se filtrira i steriliše u frakcijskim koracima od 30 minuta 3 puta sa intervalom od 1 dan ili u autoklavu pod pritiskom od 0,05 MPa 20 minuta. Koristi se u tečnom, polutečnom i agar obliku za porođaj Leuconostoc I Lactobacillus.

MRS mediji (izmijenio A.A. Lanzier)

MRS-1 okruženje. Otopiti u 200 ml destilovane vode, g: mangan sulfat 0,05, magnezijum sulfat 0,2, cistein 0,2, kalijum hidrogen fosfat 2, amonijum citrat 2, natrijum acetat 5, glukoza 20, pepton 10, tween 1 ml odvojeno u maloj količini vruće destilovane vode), autolizat kvasca (vidi Dodatak 2) 50 ml, ekstrakt jetre 100 ml. Zapremina tečnosti se dovede do 500 ml destilovanom vodom i doda se 500 ml Bogdanovljevog hidrolizovanog obranog mleka, nesterilizovanog, pH 6,2-6,8. Medij se filtrira i steriliše parom koja teče frakciono.

MRS-2 okruženje. Dizajniran za muzejsko skladištenje sojeva Lactobacillus. Pripremljeno na bazi MRS-1 podloge sa dodatkom 0,15% agara. Rezultat je polutečni medij, koji stvara više anaerobnih uslova u odnosu na tečni.

MRS-3 okruženje. Dizajniran za "raznoliku seriju" pri identifikaciji bakterija mliječne kiseline. Zasnovan je na medijumu MPC-1, ali bez glukoze, ekstrakta jetre i hidrolizovanog mleka. Ugljikohidrati i polihidrični alkoholi se dodaju u količini od 0,5%. Količina dodanog agara je 0,15%. pH okoline je 7,0. Indikator je hlorofenol crveno (0,004%). Indikator se rastvori u 1-2 ml etil alkohola i dodaje u medijum pre sterilizacije. Klorofenol crveno daje prijelaz boje iz crveno-ljubičaste u žutu u pH rasponu od 4,8-6,4.

Ekstrakt jetre

Svježa goveđa džigerica se sitno isječe i napuni vodom (1 kg jetre: 1 litar vode). Kuvajte 30 minuta i filtrirajte, a zatim sterilišite pod pritiskom od 0,05 MPa 20 minuta.

srijeda 10

Za 1 litar nehmeljene pivske sladovine (8% DM) ili 1 litar vode sa kvascem dodati g: mangan sulfat 0,05, magnezijum sulfat 0,2, cistin ili cistein 0,2, kalijum hidrogen fosfat 2, amonijum citrat 0,2, 2 acetat,5. saharoza 20, pepton 10, autolizat kvasca 50 ml. Svaka komponenta se otapa navedenim redoslijedom u sladu (za Lactobacillus) ili voda sa kvascem (za Leuconostoc). U prvom slučaju, pH okoline je 5,5, u drugom - 6,0. Dodati 1,5% agar i sterilisati tekućom parom. Sterilna kreda se može dodati u Petrijeve zdjelice.

U 150 ml filtriranog soka od paradajza, uz zagrijavanje otopiti 0,75 ml Tween-80 i 37,5 g glukoze, dodati 5 ml autolizata kvasca, 600 ml obranog mlijeka (obranog mlijeka) i 150 ml rastopljenog 2% mesnog pepton agara. pH je podešen na 7,0. Medij se sipa u epruvete od 6-7 ml, steriliše pod pritiskom od 0,05 MPa 20 minuta, ohladi, inokulira ispitivanim bakterijama mlečne kiseline i na vrh se nanese 1-2 ml rastopljenog 2% mesno-peptonskog agara. . U slučaju slabog stvaranja plina, čep se odvaja od glavnog medija, u slučaju jakog stvaranja plina, on se diže visoko ili izleti iz epruvete.

Podloga za uzgoj bakterija koje stvaraju sluz

Opcija 1. Agar za meso sa 10% saharoze.

Opcija 2. Sastav, g/l: sirovi šećer 40, natrijum hidrogenfosfat 2, natrijum hlorid 0,5, magnezijum sulfat 0,1, gvožđe sulfat 0,01, kalcijum karbonat 10, agar 20.

Wednesday Wittenbury

Sastav podloge uključuje, g/l: ekstrakt mesa 5, pepton 5, autolizat kvasca 50 (ili ekstrakt kvasca 50), 1,6% rastvor bromokrezola ljubičastog 1,4 ml, pH 6,8-7,0. Sterilizirajte tekućom parom 3 puta po 45 minuta u razmaku od 1 dana.

Podloga za uzgoj truležnih asporogenih bakterija

Mliječni agar

Obrano mleko se sipa u epruvete od 5 ml i steriliše tekućom parom ili u autoklavu 20 minuta pod pritiskom od 0,05 MPa. Posebno pripremite 3% vodeni agar, sipajte 4-5 ml u epruvete i sterilišite 30 minuta pod pritiskom od 0,1 MPa. Agar se otopi, sterilno sjedini sa mlijekom i sipa u Petrijeve zdjelice, gdje je prethodno dodat uzorak za ispitivanje.

Mediji za uzgoj bakterija koje vare masti

Opcija I. U 1 litar vode dodati 5 g peptona i 3 ml autolizata kvasca. Nakon uspostavljanja pH od 7,2-7,4, dodajte 1,5% agar. Agar se otopi, podloga se filtrira i doda 1% vruće mliječne masti ili maslinovog ulja. Promešati, sipati u epruvete i sterilisati pod pritiskom od 0,1 MPa 15 minuta.

Opcija 2. U mesni pepton agar dodaje se 2-4% mliječne masti ili maslinovog ulja. Sipati 10 ml u epruvete i sterilisati pod pritiskom od 0,1 MPa 20 minuta. Dobro protresite medijum pre nego što ga dodate u šolje.

Primer takvog medijuma je želatina sa hidrolizovanim mlekom. U hidrolizovano mleko se dodaje 10% želatina (možete koristiti hidrolizovani kazein ili juha od mesnog ekstrakta), ostavite da nabubri i zagrejte uz mešanje do temperature od 50 °C. pH okoline je 7,0-7,2. Medij se filtrira i steriliše u epruvetama pod pritiskom od 0,075 MPa 20 minuta.

Podloga za uzgoj bakterija octene kiseline

Dodajte 4 vol. sladu ili kupusu. % etil alkohola i 20 jedinica/ml antibiotika monomicina, koji inhibira rast bakterija mliječne kiseline.

Podloga za uzgoj anaerobnih tvari

Winogradsky Wednesday. U 1 litru destilovane vode rastvoriti g: kalijum hidrogenfosfat 1, magnezijum sulfat 0,5, mangan sulfat 20, glukozu 20, natrijum hlorid i gvožđe hlorid - u tragovima.

Srijeda Kita-Tarozzi. Komadići džigerice ili mesa, skuvani i oprani vodom, spuštaju se u epruvetu tako da prekriju dno. Nalijte mesno-peptonsku čorbu sa 1% glukoze (pH 7,2-7,4) na "/2 zapremine epruvete i spustite plovak. Na vrh nalijte sloj vazelinskog ulja visine 1 cm. Sterilizirajte 15 minuta pod pritiskom od 0,1 MPa 2 puta u intervalima od 30 min.

Medij za uzgoj termofilnih anaeroba koji proizvode sumporovodik

Sastav podloge uključuje, g/l: pepton 10, željezni sulfat 1, agar 20. Prije punjenja u svaku epruvetu se stavlja čist željezni ekser. Nakon zasijavanja šećera, u epruvetu se sipa sloj sterilnog vazelina. Ako šećer sadrži bakterije koje proizvode sumporovodik, u agaru se stvaraju karakteristične crne kolonije.