آبگوشت شکر و شکر آگاربا افزودن یک یا آن کربوهیدرات به مقدار 0.5 تا 1 درصد به آبگوشت معمولی یا آگار ساده مذاب تهیه می شود. کربوهیدرات در مقدار کمی آب حل می شود و سپس به محیط غذایی اضافه می شود. استریل کردن آب قند و آگار در دستگاه کوخ به مدت 3 روز متوالی به مدت 1 ساعت انجام می شود.
آگار خون، سرم یا مایع آسیتیتحت آسپسیس دقیق تهیه شده است. 25-20 درصد سرم استریل یا مایع آسیتی یا 25-5 درصد خون استریل دفیبرینه شده به آگار کمی قلیایی تمام شده اضافه می شود، ذوب می شود و دوباره تا 45 درجه سرد می شود، در لوله های آزمایش یا ویال ها ریخته می شود. پس از اختلاط کامل (جلوگیری از تشکیل حباب و کف)، آگار موجود در لوله های آزمایش را کنده و محتویات ویال ها را در ظروف هایدنرایش می ریزند. آبگوشت با سرم، مایع آسیتی یا خوندرست مثل آگار اما بدون حرارت. برای کنترل عقیمی، آبگوشت را به مدت 48 ساعت در ترموستات در دمای 37 درجه قرار می دهند.

رسانه های مغذی تشخیصی افتراقی. ترکیب و هدف.

محیط اندوبلافاصله قبل از استفاده آماده شده است. به 100 میلی لیتر گوشت-پپتون آگار یا هوتینگر براث آگار (PH 7.6)، 1 گرم لاکتوز شیمیایی خالص حل شده در 5 میلی لیتر آب استریل را به صورت استریل اضافه کنید، تا دمای 70 درجه خنک کنید و مخلوطی از 0.5 میلی لیتر از محلول اشباع شده بازی اضافه کنید. فوشسین و 1.25 میلی لیتر محلول سولفید سدیم 10 درصد تازه تهیه شده، تکان داده و در فنجان ریخته می شود. برای خشک شدن، فنجان های باز را به مدت 30 دقیقه در ترموستات 37 درجه قرار می دهند.

در محیط اندو، E. coli کلنی های قرمز با رنگ فلزی تولید می کند و باکتری های گروه تیفوئید-پاراتیفوئید و اسهال خونی کلنی های بی رنگ تولید می کنند.

سری متنوع کربوهیدرات ها (Hiss Medium).به 100 میلی لیتر آب، 1 گرم پپتون و 0.5 گرم نمک خوراکی اضافه کنید. پپتون و نمک به مدت چند دقیقه در آب داغ حل می شوند و از طریق صافی کاغذی فیلتر می شوند (محلول باید کاملاً شفاف باشد). pH را روی 7.0 تنظیم کنید. 1% از یکی از کربوهیدرات های مورد استفاده در محیط مشخص شده حل می شود، شناورها برای گرفتن گاز به ته لوله های آزمایش پایین می آیند (که نشان دهنده تجزیه عمیق قندها است) و یک نشانگر اضافه می شود. موارد زیر به عنوان شاخص استفاده می شود:

الف) تنتور تورنسل - 5 میلی لیتر در هر 100 میلی لیتر محیط. در محیط اسیدی، تنتور تورنسل قرمزی را نشان می دهد، در محیط قلیایی آبی می شود.

ب) آزولیتمین، که یک آماده سازی تورنسل خالص است، نمک پتاسیم آن (0.25 گرم آزولیتمین در هر 1 لیتر محیط اضافه می شود).

ج) بروموتیمول بلاو - در هر 1 لیتر محیط، 1 میلی لیتر محلول الکل 1.6٪ شاخص (محیط سبز می شود، با تشکیل قلیایی آبی می شود، با تشکیل اسید زرد می شود).

د) اندیکاتور آندره که از 1 گرم اسید فوشین، 400 میلی لیتر آب مقطر و 64 میلی لیتر محلول معمولی هیدروکسید سدیم تشکیل شده است. شاخص 1% به محیط غذایی اضافه می شود. محیط داخل لوله آزمایش باید به رنگ زرد نی و بدون رنگ صورتی باشد. در یک محیط اسیدی، رنگ محیط به قرمز تغییر می کند.

این شاخص به منظور تعیین تغییرات در واکنش محیط غذایی که تحت تأثیر تخمیر کربوهیدرات رخ می دهد، به عنوان مثال برای شناسایی فعالیت بیوشیمیایی میکروب ها اضافه می شود. مورد دوم برای تشخیص میکروبیولوژیکی تعدادی از بیماری های عفونی (تب حصبه، اسهال خونی، وبا و غیره) اهمیت زیادی دارد. محیط های حاوی کربوهیدرات و یک نشانگر در لوله های استریل ریخته شده و به مدت 3 روز در دمای 100 درجه استریل می شوند.

ردیف رنگارنگ کوتاه. تغییرات در طول رشد E. coli، S. typhi.

روشهای جداسازی کشت خالص هوازی

روش دریگالسکی

جداسازی یک کشت خالص بی هوازی.

مهارت های عملی را ببینید

روش های ویروس شناسی هدف، اصل.

روش ویروس شناسی

مراحل اصلی:

1. مجموعه ای از مواد آزمون.

2. انتخاب بر اساس اصل سیتوتروپیسم و ​​به دست آوردن یک سیستم تست حساس، تعیین زنده بودن آن.

3. عفونت سیستم انتخاب شده.

4. نشان دادن ویروس بر اساس تشخیص نوکلئیک اسید، آنتی ژن ها، هماگلوتینین، CPD، اجزاء آن.

5. شناسایی و تیتراسیون ویروس بر اساس موارد زیر انجام می شود:

الف) تعیین آنتی ژن های ویروس با استفاده از واکنش های ایمونولوژیک (RIF، ELISA، RPGA، RSK، RN، VIEF، و غیره). ب) بررسی پاتولوژیک اندام ها و بافت ها. ج) CPP؛ د) علائم بالینی، آزمایشات بیولوژیکی (کراتوکونژونکتیو و غیره).

روش های تشخیص ویروس

هنگامی که کشت های سلولی با ویروس ها آلوده می شوند، تظاهرات قابل مشاهده مختلفی از عملکرد ویروس را می توان به دست آورد:

1. اثر سیتوپاتیک ویروس بر کشت سلولی (CPE)- وقوع تغییرات دژنراتیو مورفولوژیکی قابل مشاهده در آن؛

2. کسب توانایی یک کشت سلولی آلوده به جذب خون- برای جذب گلبول های قرمز در سطح لایه سلولی؛

3. تشکیل در یک کشت سلولی آلوده در زیر یک لایه متراکم از پوشش مخصوص آگار با ویژگی پلاک ها، که "کلونی های منفی" ویروس ها هستند.

4. آخال های داخل سلولی

طبقه بندی رسانه های فرهنگ:

طبیعی- شامل محصولاتی با منشاء حیوانی یا گیاهی و دارای ترکیب شیمیایی نامشخص است. به عنوان مثال: آب سبزیجات و میوه ها، بافت های حیوانی، خون، شیر، تخم مرغ و غیره. (IPA، MPB).

نیمه ترکیبی- ترکیب شامل ترکیباتی با ماهیت شیمیایی شناخته شده و موادی با ترکیب ناشناخته است. به عنوان مثال: MPB با گلوکز، محیط Endo، محیط Sabouraud.

مصنوعی- فقط حاوی ترکیبات شیمیایی خالص در غلظت های دقیق است. در آزمایشات آزمایشگاهی استفاده می شود. به عنوان مثال: محیط چاپک، اوملیانسکی، اوشینسکی و غیره.

هدف رسانه فرهنگ

جهانی(هدف عمومی) - مناسب برای رشد بسیاری از انواع میکروارگانیسم ها و به عنوان پایه ای برای محیط های غذایی خاص استفاده می شود. مثال: MPB، MPA، محیط Hottinger، GRM، محیط تیوگلیکولات.

ویژهدر مواردی که میکروارگانیسم ها در محیط های ساده رشد نمی کنند استفاده می شود. اینها شامل خون، سرم آگار، آب پنیر براث، آسیت براث، آسیت آگار و غیره هستند.

1. محیط های انتخابی- برخی از میکروارگانیسم ها سریعتر و شدیدتر از انواع دیگر باکتری ها روی آنها رشد می کنند. به عنوان مثال، آب پپتون قلیایی 1٪ یک محیط انتخابی برای ویبریوس وبا، محیط Roux و Leffler برای پاتوژن های دیفتری است.

2. انتخابی -به لطف افزودنی های انتخابی (صفرا، رنگ ها، آنتی بیوتیک ها و غیره) آنها قادر به سرکوب رشد برخی از انواع میکروارگانیسم ها هستند، اما بر انواع دیگر تأثیر نمی گذارند. مثال‌ها: محیط مولر برای باکتری‌های تیفوئید-پاراتیفوئید، فورازولیدون-توئین آگار برای کورینه‌باکتری‌ها و میکروکوکس‌ها انتخابی است. افزودن آنتی‌بیوتیک‌ها به محیط، آن‌ها را برای قارچ‌ها انتخاب می‌کند (مثلاً محیط Sabouraud و غیره).

3. تشخیص افتراقی- گروهی از رسانه ها که تعیین خواص بیوشیمیایی میکروارگانیسم ها و تمایز آنها را ممکن می سازد. آنها برای تعیین خواص پروتئولیتیک، پپتولیتیک، ساکارولیتیک، همولیتیک، لیپولیتیک و کاهنده (Endo, Levin, Ploskirev, Gissa media) به محیط هایی تقسیم می شوند.

4. نگهدارنده (حمل و نقل) -

طراحی شده برای حفظ زنده ماندن میکروارگانیسم ها از لحظه جمع آوری

مواد زیستی قبل از کشت برای تشخیص

مایع(آبگوشت) - مطالعه خصوصیات فیزیولوژیکی و بیوشیمیایی و تجمع زیست توده میکروارگانیسم ها

نیمه مایع(1٪ آگار) - ذخیره سازی کشت و کشت بی هوازی

متراکم(3-5% آگار) - جداسازی کشتهای خالص، تجمع، ثبت کمی، مطالعه خواص فرهنگی، روابط متضاد

فلهذخیره سازی بذر در صنعت (ارن، سبوس)

خشک- تولید شده توسط صنعت برای تهیه محیط های غذایی

سیستم حمل و نقل با محیط استوارت

محیط استوارت یک بستر نیمه جامد و فاقد مواد مغذی برای حفظ و انتقال طیف وسیعی از میکروارگانیسم‌های بیماری‌زا مانند نایسریا گونوره، هموفیلوس آنفولانزا، کورینه باکتریوم دیفتریه، تریکوموناس واژینالیس، استرپتوکوکوس، سالمونلا، شیگلا اسپ.غیره. سخت ترین میکروارگانیسم ها در این محیط بیش از یک روز زنده می مانند، بقیه تا چند روز.

وجود تیوگلیکولات در محیط، فعالیت آنزیمی باکتری ها را سرکوب می کند و عدم وجود نیتروژن مانع از تولید مثل آنها می شود.

سیستم حمل و نقل با محیط کری بلر

محیط انتقال کری بلر اصلاح شده از محیط انتقال پایه استوارت است که به طور خاص برای نمونه های مدفوع طراحی شده است.

گلیسروفسفات که متابولیت برخی از انتروباکتری ها است. اشریشیا کلی، کلبسیلا پنومونیه،و غیره)، با فسفات معدنی جایگزین شده است،

متیلن بلو حذف شد و pH محیط به 8.4 افزایش یافت.

محیط کری بلر امکان حفظ بیشتر پاتوژن ها از جمله میکروارگانیسم های سختگیر مانند Neisseria sp.، Haemophilus sp.، Streptococcus sp..

این محیط برای حمل بی هوازی استاندارد است.

سیستم حمل و نقل با محیط ایمز

محیط انتقال ایمز اصلاح دیگری از محیط انتقال پایه استوارت است که در آن گلیسروفسفات با فسفات معدنی جایگزین می شود، زیرا گلیسروفسفات متابولیت برخی از انتروباکتری ها است. اشریشیا کلی، کلبسیلا پنومونیه، و غیره.) و ممکن است از رشد برخی از میکروارگانیسم های گرم منفی حمایت کند.

متیلن بلو با کربن فعال درجه دارویی جایگزین شده است.

برای حفظ نفوذپذیری سلول های باکتریایی، کلسیم و منیزیم به محیط اضافه شد.

این محیط قادر به حمایت از میکروارگانیسم هایی مانند نایسریا، هموفیلوس، کورینه باکتریا، استرپتوکوک، انتروباکتریاسهو غیره، اما بهترین نتیجه با کشت در 24 ساعت اول حاصل می شود.

محیط غنی‌سازی جهانی: پپتون آگار گوشت (MPA) و گوشت پپتون براث (MPB)

آنها رسانه اصلی برای تلقیح میکروارگانیسم ها برای بررسی خلوص کشت ها قبل از بیوشیمیایی و سروتیپ هستند.

آنها برای کشت و شمارش میکروارگانیسم های بی تکلف استفاده می شوند. در شکل نیمه مایع، محیط را می توان برای ذخیره میکروارگانیسم های کنترل (مرجع) استفاده کرد.

محیط های ذخیره سازی جهانی محیط Hottinger

طراحی شده برای کشت میکروارگانیسم های مختلف مانند انتروباکتری ها، سودوموناس آئروژینوزا، استافیلوکوک ها و برخی از انواع استرپتوکوک ها. در صورت لزوم می توان آن را با کربوهیدرات و نمک غنی کرد.

حاوی هیدرولیز هوتینگر است که از هیدرولیز آنزیمی گوشت چرخ کرده (گوشت گاو) با پانکراتین و به دنبال آن فیلتراسیون و افزودن کلروفرم به عنوان نگهدارنده به دست می آید.

محیط های ذخیره سازی جهانی:محیط مولر-هینتون

از این محیط برای کشت استفاده می شود Neisseria sp.و برای تعیین حساسیت میکروارگانیسم ها به عوامل ضد میکروبی.

چهارشنبه مک کانکی

محیط های MacConkey به عنوان محیط های افتراقی برای جداسازی انتخابی انتروباکتری ها و باسیل های گرم منفی مرتبط توصیه می شوند.

سویه های لاکتوز مثبت با کلنی های صورتی یا قرمز رشد می کنند که ممکن است توسط ناحیه ای از رسوب نمک صفراوی احاطه شده باشند.

رنگ قرمز در نتیجه اسیدی شدن محیط توسط محصولات تجزیه لاکتوز (زمانی که pH به زیر 6.8 می رسد) و جذب قرمز خنثی ظاهر می شود.

سویه هایی که لاکتوز را تخمیر نمی کنند (شیگلا، سالمونلا) معمولاً کلنی های شفاف و بی رنگ تشکیل می دهند و محیط را تغییر نمی دهند.

محیط های تشخیص افتراقی:محیط اندو

این محیط توسط Endo به عنوان یک محیط کشت برای تمایز میکروارگانیسم های تخمیری لاکتوز و غیر تخمیری ساخته شده است. برای بررسی میکروبیولوژیکی آب، فاضلاب، لبنیات و سایر محصولات غذایی استفاده می شود.

سولفیت سدیم و فوشین بازی بر میکروارگانیسم های گرم مثبت اثر مهاری دارند. لاکتوز توسط میکروارگانیسم ها به آلدهید و اسید تجزیه می شود. آلدهید به نوبه خود، فوشسین را از مجموعه فوشین-سولفیت آزاد می کند و رنگ قرمز مستعمرات را تقویت می کند. در E.coli، این واکنش بسیار واضح است و با تبلور فوشسین همراه است که با جلای فلزی مایل به سبز رنگ (Muchsin Gloss) کلنی ها ظاهر می شود.

محیط های تشخیص افتراقی:زرده نمک آگار

این محیط به عنوان یک محیط انتخابی برای جداسازی کشت های استافیلوکوک با اهمیت بالینی استفاده می شود.

مانیتول یک بستر قابل تخمیر و تمایز و همچنین منبع کربن است.

افزودن (حداکثر 5 درصد حجمی در حجم) امولسیون زرده تخم مرغ، تعیین فعالیت لیپاز میکروارگانیسم ها را ممکن می سازد. امولسیون در یک محیط شور شفاف می شود، بنابراین، در حضور فعالیت لیپاز، یک ناحیه مات زرد در اطراف کلنی ها تشکیل می شود.

محیط های تشخیص افتراقی:ویلسون بلر یا بیسموت سولفیت آگار

محیط انتخابی برای جداسازی سالمونلا.

گوارش پپتیک بافت حیوانی و عصاره گوشت به عنوان منبع مواد مغذی نیتروژن دار، کربن، گوگرد، ویتامین های گروه B و عناصر کمیاب لازم برای رشد این باکتری ها عمل می کند.

سبز درخشان از رشد همه باکتری های گرم مثبت جلوگیری می کند. گلوکز یک کربوهیدرات قابل تخمیر است. سولفات آهن می تواند تولید سولفید هیدروژن را تشخیص دهد.

بیسموت یک فلز سنگین است که از رشد بیشتر باکتری های گرم منفی روده به جز سالمونلا جلوگیری می کند.

سالمونلاها سولفات آهن را در حضور گلوکز و سولفیت بیسموت به سولفید فرو کاهش می دهند که کلنی های آنها را سیاه می کند.

محیط های انتخابی ویژه:محیط لوفلر

این محیط با افزودن سرم اسب برای کشت استفاده می شود کورینه باکتریوم دیفتریاز مواد بالینی و زیر کشت های کشت خالص این میکروارگانیسم ها.

غلظت بالای سرمی به تعیین فعالیت پروتئولیتیک میکروارگانیسم ها و همچنین تشکیل رنگدانه کمک می کند. پپتون و عصاره گوشت مواد مغذی ضروری را برای میکروارگانیسم ها فراهم می کند. گلوکز یک بستر قابل تخمیر و منبع انرژی است.

رسانه انتخابی ویژه:کامپیلوباکاگار

محیط انتخابی برای کمپیلوباکتر که شامل پایه خون آگار با خون گوسفند یا خون اسب و آنتی بیوتیک بود.

اجزای ضد میکروبی به طور قابل توجهی از رشد میکرو فلور طبیعی جلوگیری می کند و باعث رشد و دفع از مدفوع می شود. Campylobacter fetus ssp. ژژونی.

وجود آمفوتریسین B در مکمل به طور قابل توجهی یا به طور کامل رشد قارچ ها را سرکوب می کند؛ سفالوتین معرفی شده بعداً سرکوب میکرو فلور روده طبیعی را افزایش می دهد.

مستعمرات Campylobacter fetus ssp. ژژونیدارای ویژگی مخاطی، خاکستری مسطح با خطوط نامنظم یا برجسته، گرد، بدون همولیز.

برخی از سویه ها ممکن است کلونی های زرد مایل به قهوه ای یا صورتی ایجاد کنند.

رشد ادغام یا ازدحام ممکن است در سطح مرطوب محیط رخ دهد.

رسانه های انتخابی توسط S.N. Vinogradsky و M. Beyerinck وارد عمل میکروبیولوژیکی شدند. اینها محیط های غذایی هستند که در آنها با افزودن یک یا چند ترکیب شیمیایی، شرایط بهینه برای رشد و تولیدمثل یک نوع میکروارگانیسم (یا گروهی از میکروارگانیسم های مرتبط) و شرایط نامطلوب برای بقیه ایجاد می شود. چنین محیط‌هایی عمدتاً برای جداسازی یک کشت خالص میکروارگانیسم‌ها از زیستگاه‌های طبیعی آنها و برای تجمع توده‌ای از فرهنگ‌ها (روش شیمیایی برای جداسازی یک کشت خالص) استفاده می‌شوند. به عنوان مثال، یک محیط مغذی که سرم اسب منعقد شده است، یک محیط انتخابی برای باکتری دیفتری، آب پپتون قلیایی برای ویبریوکلرا، آبگوشت صفرا برای عامل ایجاد کننده تب حصبه، آبگوشت کبد برای بروسلا و غیره است.

تجمع میکروب ها در محیط های غذایی انتخابی در بسیاری از موارد به عنوان یک مرحله مقدماتی مهم در جداسازی کشت های خالص از مواد آزمایشی اصلی (به عنوان مثال، ویبریو کلرا یا باکتری تیفوئید از مدفوع بیماران یا ناقلین و غیره) عمل می کند.

شما از محیط های مغذی متمایز چه می فهمید؟

رسانه‌های تشخیصی افتراقی آنهایی هستند که علاوه بر موادی که رشد و نمو میکروارگانیسم‌ها را تضمین می‌کنند، حاوی موادی هستند که به‌عنوان سوبسترا برای آنزیم‌های خاص استفاده می‌شوند. بر اساس تغییر کیفی در بستر، حضور یک آنزیم خاص تعیین می شود (با استفاده از یک شاخص که به حضور محصولات تجزیه سوبسترا در محیط غذایی واکنش نشان می دهد ارزیابی می شود).

هر نوع میکروارگانیسم با مجموعه ای نسبتاً پایدار از آنزیم ها مشخص می شود. تعیین مجموعه ای از آنزیم ها با استفاده از محیط های تشخیص افتراقی، تمایز انواع میکروارگانیسم ها را ممکن می سازد. به عنوان مثال، آگار خون به شما امکان می دهد آنزیم همولیزین را شناسایی کنید، رسانه های او - آنزیم های ساکارولیتیک (کربوهیدرات ها)، ژلاتین برای در نظر گرفتن خواص پروتئولیتیک میکروب ها و غیره استفاده می شود.

آگار خون. وجود آنزیم همولیزین با تخریب گلبول های قرمز خون و تشکیل یک ناحیه نورانی در اطراف میکروب های رشد یافته در خون آگار قضاوت می شود.

رسانه او. وجود آنزیم ها - کربوهیدرات ها که کربوهیدرات ها را به اسید تجزیه می کنند، با تغییر pH محیط به سمت اسیدی و تغییر رنگ محیط غذایی نشان داده می شود. از تفاوت در مجموعه آنزیم ها می توان برای بررسی خلوص کشت جدا شده و همچنین برای متمایز کردن سریع یک گونه از گونه های دیگر در طول مطالعه اولیه تلقیح مواد عفونی استفاده کرد.

معرف های شیمیایی

1. معرف های شیمیایی چیست و چه کاربردی دارند؟

معرف های شیمیایی- مواد مورد استفاده در عمل آزمایشگاهی برای انجام واکنش های شیمیایی مختلف.

در بیشتر موارد، معرف های شیمیایی مواد فردی هستند، اما اغلب آنها ترکیب پیچیده ای دارند. هیچ طبقه بندی پذیرفته شده ای از معرف های شیمیایی وجود ندارد، اغلب آنها به معرف های شیمیایی تحلیلی و هر چیز دیگری تقسیم می شوند.

2. در دامپزشکی برای چه اهدافی استفاده می شود؟

در دامپزشکی از معرف های شیمیایی برای اهداف تحلیلی و تشخیصی در مطالعات بالینی، دامپزشکی-بهداشتی، بهداشتی، کارشناسی، بیوشیمیایی و سایر مطالعات آزمایشگاهی استفاده می شود. روش های تحقیقاتی مورد استفاده و توسعه یافته در عمل بیولوژیکی و بالینی به طیف گسترده ای از معرف های شیمیایی نیاز دارد که باید طیف گسترده ای از الزامات را برآورده کند. به عنوان مثال، مطالعات بالینی و بیوشیمیایی به بسترهای بسیار خالص برای آنزیم‌ها، خود آنزیم‌ها، معرف‌هایی برای گروه‌های خاص (SH، NH3، گروه‌های COOH و غیره) نیاز دارند. برای انجام سنتزهای معدنی و آلی، و همچنین برای آنالیزهای کمی و کیفی، از جمله. در هنگام کنترل دامپزشکی و بهداشتی در صنایع مختلف، تجزیه و تحلیل) داروها، هنگام انجام تجزیه و تحلیل دامپزشکی، بهداشتی و بهداشتی محصولات غذایی، هوا، آب و غیره، تعداد زیادی از طیف گسترده ای از معرف های شیمیایی بسیار خالص استفاده می شود.

1.با ترکیبمواد مغذی به دو دسته تقسیم می شوند ساده و پیچیده

یک گروه از محیط های همه منظوره وجود دارد - ساده. این گروه شامل براث گوشت-پپتون (آبگوشت مغذی ساده)، گوشت-پپتون آگار (آگار مغذی ساده)، ژلاتین مغذی است. از این محیط ها برای رشد بسیاری از میکروب های بیماری زا استفاده می شود. محیط های عمومی یا محیط های غذایی ساده معمولاً از هیدرولیزها با افزودن پپتون و کلرید سدیم تهیه می شوند. آنها همچنین به عنوان پایه ای برای تهیه رسانه های پیچیده استفاده می شوند.

همچنین با توجه به ترکیب آنها متمایز می شوند مواد پروتئینی، بدون پروتئین و مواد معدنی.

2. بر اساس مبدامحیط ها تقسیم می شوند مصنوعی و طبیعی (طبیعی).

محیط های غذایی طبیعی ممکن است حاوی اجزای حیوانی (به عنوان مثال، خون، سرم، صفرا) یا گیاهی (به عنوان مثال، قطعات سبزیجات و میوه ها) باشند.

3. بر اساس هدفاختصاص دهد رسانه های نگهدارنده(برای کاشت اولیه و حمل و نقل)، محیط غنی سازی(برای تجمع گروه خاصی از باکتری ها) رسانه های فرهنگی(کلی ساده، پیچیده ویژه و برای تشکیل سم)، محیط های جداسازی و تجمع (نگهدارنده، غنی سازی و انتخابی) و محیط شناسایی(دیفرانسیل و انتخابی- دیفرانسیل).

محیط کشت نگهدارندهجلوگیری از مرگ پاتوژن ها و سرکوب رشد ساپروفیت ها. پرکاربردترین آنها مخلوط گلیسیرین، محلول هیپرتونیک، نگهدارنده گلیسیرین با LiCl 2، محلول سیترات سدیم و دی اکسی کولات سدیم است.

محیط های غنی کننده برای باکتری ها

رسانه های غنی سازی(به عنوان مثال، محیط کیتا تاروزی، براث سلنیت، محیط تیوگلیکولات) برای تجمع گروه خاصی از باکتری ها با ایجاد شرایطی بهینه برای برخی گونه ها و نامطلوب برای برخی دیگر استفاده می شود. اغلب از رنگ ها و مواد شیمیایی مختلف به عنوان عوامل استفاده می شود - نمک های صفراوی، Na+ تتراتیونات، K تلوریت، آنتی بیوتیک ها، فوشسین، بنفش جنتی، سبز درخشان و غیره.

همچنین با تعیین وقت قبلی تفاوت بین محیط ها تشخیص انتخابی، ویژه و افتراقی.

محیط های انتخابی (انتخابی، انتخابی، انباشتگی، غنی سازی).اصل ایجاد محیط های غذایی انتخابی بر اساس برآوردن نیازهای اولیه بیوشیمیایی و انرژی نوع میکروبی است که برای کشت در نظر گرفته شده است، یا بر اساس افزودن بازدارنده هایی که رشد میکرو فلور همراه را سرکوب می کنند. ترکیب و غلظت معینی از مواد مغذی، ریز عناصر، فاکتورهای رشد با مقدار pH کاملاً تعریف شده یا افزودن بازدارنده‌ها شرایط بهینه را برای کشت یک یا چند نوع میکروارگانیسم فراهم می‌کند. هنگام کاشت مواد حاوی مخلوطی از میکروب های مختلف روی آنها، ابتدا رشد گونه هایی که محیط برای آنها انتخابی است ظاهر می شود. نمونه هایی از محیط های انتخابی عبارتند از: آبگوشت صفرا، آبگوشت سلنیت، محیط Ploskirev - برای رشد میکروب های خانواده روده، آب پپتون قلیایی - برای Vibrio cholerae.

آبگوشت صفرا. 10-20 درصد صفرای گاو به MPB اضافه می شود. صفرا رشد کوکسی و فلور هوایی را سرکوب می کند، اما برای تکثیر سالمونلا مفید است.

آبگوشت سلنیت. این شامل آبگوشت فسفات با افزودن نمک سدیم سلنیت است که یک مهارکننده رشد فلور کوکال و اشریشیا کلی است، اما رشد سالمونلا را مهار نمی کند.

چهارشنبه پلوسکیروا. محیطی متراکم حاوی بازدارنده های E. coli، coli، اما برای رشد شیگلا و سالمونلا مساعد است که تولید مثل آن توسط نمک های سبز درخشان و صفراوی مهار نمی شود.

آب پپتون. حاوی 1% پپتون و 0.5% کلرید سدیم. محیط برای Vibrio cholerae انتخابی است، زیرا آنها بهتر از سایر باکتری ها در "محیط های گرسنه" تکثیر می شوند، به ویژه با واکنش قلیایی، زیرا خود مواد زائد اسیدی ترشح می کنند.

محیط های خاصبرای کشت باکتری هایی که در محیط های غذایی ساده رشد نمی کنند ضروری است. برای برخی ارگانیسم ها، اضافه کردن کربوهیدرات ها، خون و سایر مواد مغذی اضافی به محیط های غذایی ساده ضروری است. نمونه هایی از محیط های غذایی ساده عبارتند از: براث قند و شکر آگار برای استرپتوکوک (به ترتیب از MPB و MPA تهیه شده اند که 0.5-2٪ گلوکز به آن اضافه می شود).

محیط های تشخیص افتراقیبرای تعیین گونه های میکروب مورد مطالعه بر اساس ویژگی های متابولیسم آن استفاده می شود. با توجه به هدف آنها، محیط های تشخیص افتراقی به شرح زیر تقسیم می شوند:

1. رسانه برای تشخیص توانایی پروتئولیتیکمیکروب های حاوی شیر، ژلاتین، خون و غیره

2. محیط با کربوهیدرات ها و الکل های پلی هیدریک برای تشخیص مختلف آنزیم های ساکارولیتیک

شاخص‌های زیر به ترکیب رسانه‌های تشخیصی افتراقی که برای شناسایی خواص ساکارولیتیک و آنزیم‌های ردوکس طراحی شده‌اند اضافه می‌شوند: قرمز خنثی، فوشین اسیدی، آبی بروموتیمول، آبی آبی با اسید روزولیک (BP). با تغییر رنگ آن در مقادیر مختلف pH، نشانگر وجود آنزیم و تجزیه ماده وارد شده به محیط را نشان می دهد.

نمونه هایی از محیط های تشخیص افتراقی:

محیط اندو. شامل MPA با افزودن 1% لاکتوز و فوشین بازی (شاخص) رنگ زدایی شده با سولفیت سدیم است. مدیوم اندو رنگ کمی صورتی دارد. در تشخیص عفونت های روده ای برای تمایز باکتری هایی که لاکتوز را تجزیه می کنند و محصولات اسیدی تشکیل می دهند از باکتری هایی که این توانایی را ندارند استفاده می شود. کلنی های میکروب های لاکتوز مثبت (اشریشیا کلی) به دلیل کاهش فوشسین قرمز هستند. کلنی های میکروارگانیسم های لاکتوز منفی - سالمونلا، شیگلا و غیره - بی رنگ هستند.

محیط های تشخیص افتراقی شامل کوتاه و گسترده است ردیف رنگارنگ. این شامل محیط های حاوی کربوهیدرات (Hiss media)، MPB، شیر و ژلاتین گوشت-پپتون است.

رسانه هیسبر اساس آب پپتون تهیه می شود که به آن مونو، دی یا پلی ساکاریدهای خالص شیمیایی (گلوکز، لاکتوز، نشاسته و غیره) اضافه می شود.

برای تشخیص تغییرات pH در نتیجه تشکیل اسیدها و تجزیه کربوهیدرات ها، یک شاخص به رسانه اضافه می شود. با تجزیه عمیق تر کربوهیدرات ها، محصولات گازی (CO 2، CH 4، و غیره) تشکیل می شوند که با استفاده از شناورها - لوله های آزمایش کوچک که به صورت وارونه در محیط پایین می آیند، گرفته می شوند. محیط‌های حاوی کربوهیدرات را می‌توان به‌عنوان محیط‌های متراکم با افزودن 1-0.5 درصد آگار آگار تهیه کرد. سپس تشکیل گاز با تشکیل حباب ها (شکستن) در ستون محیط تشخیص داده می شود.

در MPB، که بخشی از سری متلایی است، محصولاتی که در طی تجزیه اسیدهای آمینه و پپتون ها (ایندول، سولفید هیدروژن) تشکیل شده اند، یافت می شوند. سولفید هیدروژنبا قرار دادن یک نوار کاغذ صافی آغشته به محلول استات سرب در MPB پس از کاشت کشت شناسایی می شود. هنگامی که اسیدهای آمینه حاوی گوگرد تجزیه می شوند، سولفید هیدروژن آزاد می شود و به دلیل تشکیل سولفید سرب، کاغذ سیاه می شود. برای تعیین ایندولمی توانید از یک نشانگر پیچیده استفاده کنید. ایندول از تجزیه تریپتوفان تشکیل می شود و زمانی که این شاخص به کشت رشد یافته روی MPB اضافه شود، قابل تشخیص است. در حضور ایندول، MPB سبز یا آبی می شود.

در آزمایشگاه های باکتری شناسی عملی آنها به طور گسترده استفاده می شود روش های میکرو و اکسپرسبرای مطالعه شاخصی از خواص بیوشیمیایی میکروارگانیسم ها. سیستم های آزمایشی زیادی برای این منظور وجود دارد. متداول ترین سیستم کاغذهای شاخص استفاده می شود (SIB). SIB ها دیسک های کاغذ صافی آغشته به محلول های قند یا سایر بسترها در ترکیب با نشانگرها هستند. چنین دیسک‌هایی با کشت در یک محیط غذایی مایع در یک لوله آزمایش فرو می‌روند. تغییر رنگ دیسک با سوبسترا برای قضاوت در مورد عملکرد آنزیم استفاده می شود. سیستم های میکرو تست برای مطالعه شناسایی انتروباکتری ها توسط ظروف پلاستیکی یکبار مصرف با رسانه های حاوی بسترهای مختلف با افزودن شاخص ها نشان داده می شوند. کاشت یک کشت خالص از میکروارگانیسم ها در چنین سیستم های آزمایشی به شما امکان می دهد تا به سرعت توانایی باکتری ها در استفاده از سیترات، گلوکز، ساکارز، آزادسازی آمونیاک، ایندول، تجزیه اوره، لیزین، فنیل آلانین و غیره را شناسایی کنید.

رسانه های تغذیه ویژه (انتخابی).

رسانه رشد مخمر

مدیوم خواننده مصنوعی

ترکیب محیط شامل، گرم در لیتر: سولفات آمونیوم 3، سولفات منیزیم 0.7، نیترات کلسیم 0.04، کلرید سدیم 0.5، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 1.0، پتاسیم هیدروژن فسفات 0.1 است. pH اولیه 6.6 نیترات کلسیم، که توسط مخمر استفاده نمی شود، می تواند از محیط حذف شود. برای مطالعه تولید مثل مخمر، 2٪ شکر اضافه کنید، برای مطالعه تخمیر - 5-10٪. محیط مصنوعی کامل حاوی ویتامین های کریستالی، mcg/ml: اینوزیتول 5، بیوتین 0.0001، پانتوتنیک اسید 0.25، تیامین 1.0، پیریدوکسین 0.25، اسید نیکوتین 0.5 است. محیط را در اتوکلاو با فشار 0.1 M Pa به مدت 20 دقیقه استریل کنید.

محیط گلوکز-آمونیوم

حاوی مواد زیر در 1 لیتر آب لوله کشی: گرم: سولفات آمونیوم 5، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 0.85، پتاسیم هیدروژن فسفات 0.15، سولفات منیزیم 0.5، کلرید سدیم 0.1، کلرید کلسیم 20، کلرید کلسیم 0. مخمر (0.2٪) یا گوشت (0.3٪) عصاره و آب انگور اضافه می شود.

محیط مصنوعی برای شناسایی مخمرهای ناقص

حاوی مواد زیر در 1 لیتر آب لوله کشی گرم در لیتر: گلوکز 50، لیزین 3، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 1، سولفات منیزیم 1، سولفات آهن - آثار. هر جزء به طور جداگانه در آب حل می شود و به ترتیب مشخص شده اضافه می شود. آگار (1.5%) به محیط اضافه می شود، ذوب می شود، در لوله های آزمایش ریخته می شود و به مدت 20 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال استریل می شود.

محیط کامل با لیزین برای تشخیص مخمرهای ناقص

حاوی مواد زیر در 1 لیتر آب لوله کشی گرم در لیتر: گلوکز 50، سولفات منیزیم 1، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 2، پتاسیم لاکتات 12 میلی لیتر (محلول 50%)، /، (+) لیزین مونوهیدرات 1، محلول ویتامین (به ازای هر 100 میلی لیتر آب مقطر استریل اضافه کنید، گرم: اینوزیتول 2، کلسیم پانتوتنات 0.4، نیکوتین آمید 0.5، هیدراتیامین 0.1، آگار 20؛ pH محیط - 5-5.2. محیط در 15 میلی لیتر در لوله های آزمایش ریخته می شود و 15 دقیقه فشار 0.1 مگاپاسکال

محیط استات برای تشخیص مخمرهای ناقص

به ازای 1 لیتر آب لوله کشی، 10 گرم استات سدیم، 10 گرم کلرید آمونیوم، 5 گرم گلوکز، 3 میلی لیتر اتولیز مخمر گرفته و در لوله های آزمایش 5 میلی لیتری ریخته و با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه استریل کنید.

محیطی برای شناسایی مخمرهای خارجی که از نظر مورفولوژیکی شبیه به کشت اصلی است

10 گرم پپتون، 2 گرم هیدروژن فسفات پتاسیم در 500 میلی لیتر آب مقطر حل شده و صاف می شوند. 15 گرم آگار در فیلتر ذوب می شود، 10 گرم گلوکز، 0.4 گرم ائوزین و 0.065 میلی لیتر متیلن بلو (محلول الکل 90٪) اضافه می شود، با آب مقطر داغ به 1000 میلی لیتر تنظیم می شود، در لوله های آزمایش ریخته می شود و برای استریل می شود. 15 دقیقه در فشار 0.1 مگاپاسکال. رنگ در هنگام استریل کردن ناپدید می شود و پس از سرد شدن دوباره ظاهر می شود. این محیط بیش از 2 ماه ذخیره نمی شود.

محیطی برای تشکیل سودومایسلیوم

گلوکز پپتون آگار.به 1 لیتر آب لوله کشی، گرم: پپتون 10، گلوکز 20، آگار 30-35 اضافه کنید. به مدت 30 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال استریل کنید. در صورت لزوم، می توانید مخمر یا عصاره گوشت (0.5٪) را اضافه کنید یا به شکل مایع بپزید.

آگار سیب زمینی. 100 گرم سیب زمینی پوست کنده، شسته و نازک برش داده شده در جای خنک به مدت چند ساعت با 300 میلی لیتر آب لوله کشی می شود. عصاره صاف می شود، 230 میلی لیتر از عصاره را با آب لوله کشی به 1 لیتر آورده، 20 گرم گلوکز و 30-35 گرم آگار اضافه می شود، ذوب می شود و به مدت 1 ساعت با فشار 0.075 مگاپاسکال استریل می شود.

مخمر آب با کربوهیدرات ("سری رنگ")

توانایی مخمر در ایجاد تخمیر کربوهیدرات ها با استفاده از آب مخمر با 2% قند مورد آزمایش (گلوکز، مالتوز، ساکارز، لاکتوز، رافینوز و غیره) تعیین می شود. محیط در لوله های آزمایش با شناور، لوله های دانبار ریخته می شود و با بخار جریان کسری استریل می شود. نتایج پس از کاشت پس از 2 روز و در صورت لزوم پس از 7 روز کشت در دمای 30 درجه سانتی گراد ثبت می شود.

توانایی مخمر برای متابولیسم کربوهیدرات ها توسط اکسیداسیون بر روی محیطی با ترکیب زیر بررسی می شود، r/l: سولفات آمونیوم 5، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 1، سولفات منیزیم 0.5، اتولیت 1، قند آزمایش 10، آگار 20. محیط ریخته می شود. در لوله های آزمایش، به مدت 30 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال استریل شده، مایل آگار را آماده کنید. رشد کشت پس از 3-4 روز ارزیابی می شود.

آگار مخمر با شکر

0.5٪ کلرید سدیم، 1٪ گلوکز (یا 4 یا 10٪ ساکارز) و 2٪ آگار در مخمر آب، pH 6.8 (با گلوکز) و 6-6.5 (با ساکارز) حل می شوند. محیط در لوله های آزمایش یا فلاسک ریخته می شود و با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه استریل می شود.

رسانه های آنتی بیوتیکی

برای توسعه ترجیحی مخمر و سرکوب باکتری‌های همراه، آنتی‌بیوتیک‌های طیف گسترده‌ای به رسانه‌ها معرفی می‌شوند: استرپتومایسین (100 واحد در میلی لیتر)، پنی سیلین (20-100 واحد در میلی لیتر)، لوومایسین (50 میلی گرم در لیتر)، نئومایسین ( 20 واحد در میلی لیتر) و غیره می توانند با هم یا جداگانه به محیط اضافه شوند.

محیط برای تشکیل آسکوسپور

چهارشنبه گورودکووا.حاوی 1 لیتر آب لوله کشی، گرم: پپتون 10، کلرید سدیم 5، گلوکز 1 (یا 2.5)، آگار 20؛ PH محیط 7.3 است. داخل لوله های آزمایش بریزید و به مدت 15 دقیقه با فشار 0.1 مگاپاسکال استریل کنید.

مک کلاری استات آگار.به 1 لیتر آب مقطر، گرم: استات سدیم 8.2، کلرید پتاسیم 1.8، گلوکز 1، عصاره مخمر 2.5، آگار 15 اضافه کنید. به مدت 15 دقیقه با فشار 0.1 مگاپاسکال اتوکلاو کنید.

چهارشنبه استارکی.در 1 لیتر آب لوله کشی، گرم: پتاسیم هیدروژن فسفات 1، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 0.25، سولفات منیزیم 0.25، کلرید کلسیم 0.05، آگار 20 حل می شود. با فشار 0.05 MPa به مدت 0.05 دقیقه استریل کنید.

محیط رشد مخمر اسموفیل

به 1 لیتر شربت گلوکز (50-60 درصد DM) 5 گرم پپتون و 20 گرم آگار اضافه کنید. پپتون را می توان با آب مخمر (50 میلی لیتر) جایگزین کرد. با فشار 0.05 مگاپاسکال استریل کنید.

مخمر ملاس

200-300 گرم ملاس غلیظ را به نسبت 1: 3 با آب مخلوط کرده و تا دمای 95 درجه سانتیگراد حرارت داده و به مدت 2 ساعت می گذاریم تا بماند و در این حالت کلوئیدهای منعقد شده ته نشین شده و محلول ملاس شفاف می شود. 3 درصد دی آمونیوم فسفات به محلول اضافه می شود، با آب تا 5-8 درصد DM رقیق می شود و در لوله های آزمایش یا فلاسک ها ریخته می شود. برای تهیه یک محیط آگار، 1.5-2٪ آگار اضافه کنید. با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه در اتوکلاو یا کسری به مدت 1 ساعت با فاصله 20-24 ساعت 3 بار استریل کنید.

محیط کشت قارچ های رشته ای

آگار چغندر

چغندر قند را که خوب شسته شده به برش می ریزند، با آب لوله کشی پر می کنند (20 گرم چغندر در هر 1 لیتر آب) و به مدت 30 دقیقه می جوشانند. فیلتر با آب به حجم اولیه آورده می شود، آگار 2% اضافه می شود و با فشار 0.1 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه استریل می شود.

تفاله چغندر

چغندرهای تمیز روی رنده آسیاب می شوند، در ظروف پتری قرار می گیرند و بدون برگرداندن، با فشار 0.1 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه استریل می شوند.

چهارشنبه Capek

ترکیب محیط، گرم در لیتر: ساکارز یا گلوکز 30، دی هیدروژن فسفات پتاسیم 1.0، نیترات سدیم 2.0، سولفات منیزیم 0.5، کلرید پتاسیم 0.05، سولفات آهن 0.1، مواد تشکیل دهنده آگار 20، نمونه قبلی آگار اضافه شده است. در 1 لیتر آب مقطر حل می شود، با بخار جریان گرم می شود و pH با محلول 10٪ اسید سیتریک یا هیدروکسید سدیم به 4.0-5.5 تنظیم می شود. فیلتر کنید، داخل لوله های آزمایش بریزید و با بخار جریان جزئی 3 بار به مدت 30 دقیقه به فاصله 1 روز استریل کنید.

قند نیترات آگار Czapek-Dox

انتخاب 1.برای 1 لیتر آب مقطر، گرم: ساکارز 20، پتاسیم هیدروژن فسفات 0.5، سولفات منیزیم 0.5، کلرید سدیم 0.5، نیترات پتاسیم 1، آثار سولفات آهن، کربنات کلسیم 2-5، آگار 2.

گزینه 2. برای 1 لیتر آب مقطر، گرم در لیتر: ساکارز 30، نیترات آمونیوم 2.5، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 1، سولفات منیزیم 1، سولفات آهن 0.01، آگار 20.

محیط گلوکز-نشاسته

همان ترکیبات نمکی موجود در ساکارز نیترات آگار Czapek، اما به جای ساکارز، 25 گرم نشاسته محلول و 5 گرم گلوکز مصرف می شود.

نشاسته آمونیوم آگار

ترکیب محیط، گرم در لیتر: نشاسته محلول 10، کربنات کلسیم 3، هیدروژن فسفات پتاسیم 1، سولفات منیزیم 1، کلرید سدیم 1، سولفات آمونیوم 1، آگار 20. به مدت 30 دقیقه با فشار 0.0 مگاپاسکال استریل کنید.

چهارشنبه سابورو

به 100 میلی لیتر آب مخمر استریل، گرم: پپتون 5، گلوکز 4، آگار 1.8-2 اضافه کنید. به مدت 20 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال یا کسری استریل کنید.

اساس این محیط آب مخمر است. برای تهیه مخمر 70-100 گرم مخمر تازه فشرده (7-10 گرم مخمر خشک) را به مدت 30-20 دقیقه در 1 لیتر آب مقطر می جوشانند و به مدت 12 ساعت در استوانه بالا در سرد می گذارند. مایع ریخته می شود، 1 لیتر آب اضافه می شود، 30 دقیقه بجوشانید، فیلتر کنید، PH را به مقدار لازم تنظیم کنید. محیط آماده شده در فواصل 2-3 دقیقه ای 20 دقیقه ای با فاصله زمانی 1 روز استریل می شود. به 100 میلی لیتر آب مخمر استریل 1 درصد پپتون، 2 درصد آگار اضافه کنید، پس از حل شدن آگار، 4 درصد گلوکز یا مالتوز اضافه کنید، صاف کنید، در لوله های آزمایش ریخته و با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه استریل کنید.

محیط را می توان با استفاده از آب پپتون معمولی 1٪ نیز تهیه کرد.

محیط کشت باکتری های اسید لاکتیک

شیر هیدرولیز شده (به گفته بوگدانوف)

شیر معمولی یا بدون چربی (pH 7.6-7.8) به مدت 5 دقیقه جوشانده می شود، ظرف کاملاً تکان داده می شود و تا دمای 45 درجه سانتیگراد خنک می شود و در هر لیتر 0.5-1 گرم پانکراتین اضافه می شود، پس از 4-7 دقیقه 5 عدد اضافه می شود. میلی لیتر کلروفرم به مدت 20-18 ساعت در ترموستات با دمای 40 درجه سانتیگراد قرار دهید. پودر پانکراتین باید از قبل در مقدار کمی آب گرم رقیق شود. در ساعات اول شیر را چندین بار با درب باز هم می زنند. شیر هیدرولیز شده از طریق فیلتر کاغذی فیلتر می شود، 2-3 بار با آب رقیق می شود، pH روی 7.0-7.2 تنظیم می شود و به مدت 15 دقیقه با فشار 0.1 مگاپاسکال یا به مدت 20 دقیقه در فشار 0.05 مگاپاسکال استریل می شود.

شیر آگار هیدرولیز شده

1.5-2.0 درصد آگار به شیر هیدرولیز شده اضافه می شود. مخلوط به جوش می آید و تا زمانی که آگار کاملا حل شود نگه می دارد. محیط داغ از طریق فیلتر پنبه ای فیلتر شده، در لوله های آزمایش یا فلاسک ریخته می شود و با فشار 0.1 مگاپاسکال به مدت 10-15 دقیقه استریل می شود.

شیر بدون چربی با نشانگر

شیر بدون چربی تازه گرم شده در حالی که داغ است با تنتور تورنسل به رنگ یاسی تند رنگ می شود. با بخار جاری (3 بار به مدت 30 دقیقه با فاصله 1 روز) یا با اتوکلاو به مدت 10 دقیقه با فشار 0.1 مگاپاسکال استریل کنید.

مالت مالت با دانه مصرف شده

مالت مالت آماده می شود، اما بدون جدا کردن دانه مصرف شده (12-15٪ DM). داخل لوله های آزمایش بریزید، گچ استریل (2-4%) اضافه کنید و با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه استریل کنید.

ساکارز آگار مخمر

برای شناسایی لاکتوباسیلوسو Leuconostocاز یک محیط تهیه شده بر اساس آب مخمر با افزودن 0.5٪ کلرید سدیم، 10٪ ساکارز و 2٪ آگار استفاده کنید. PH محیط 6-6.5 است.

محیط جوانه زنی

25 گرم جوانه مالت (جو) به مدت 10 دقیقه با 500 میلی لیتر آب جوشانده می شود و پس از خنک شدن در دمای 45 تا 50 درجه سانتیگراد، از داخل کیسه کتانی صاف می شود، با پروتئین مرغ زده شده صاف می شود، دوباره جوشانده می شود و از طریق فیلتر می شود. فیلتر کاغذی برای حذف پروتئین منعقد شده 1.5٪ پپتون، 2٪ شکر، 2٪ آگار به محلول اضافه شده و به مدت 30 دقیقه در فشار 0.05 مگاپاسکال استریل می شود.

چهارشنبه کلم

200 گرم کلم سفید خرد شده را در 1 لیتر آب ریخته و به مدت 10 دقیقه جوشانده و از طریق دو لایه گاز فشرده می شود. مایع حاصل از صافی تا شده صاف شده و 2 بار رقیق شده و 2% گلوکز و 1% پپتون به جوشانده اضافه می شود و در لوله های آزمایش ریخته و با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 15 دقیقه استریل می شود. برای به دست آوردن یک محیط جامد، 2٪ آگار اضافه کنید.

رسانه MRS (مدیوم de Man)

ترکیب محیط شامل، گرم در لیتر: سولفات منگنز 0.05، سولفات منیزیم 0.2، پتاسیم هیدروژن فسفات 2، نیترات آمونیوم 2، استات سدیم 5، پپتون 10، عصاره مخمر دیفکو 5، عصاره گوشت 10، گلوکز 20. 1 میلی لیتر، pH متوسط ​​6-6.5. محیط در مراحل کسری 30 دقیقه ای 3 بار با فاصله زمانی 1 روز فیلتر و استریل می شود و یا در اتوکلاو با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه استریل می شود. به صورت مایع، نیمه مایع و آگار برای زایمان استفاده می شود Leuconostocو لاکتوباسیلوس.

رسانه MRS (اصلاح شده توسط A.A. Lanzier)

محیط MRS-1در 200 میلی لیتر آب مقطر حل کنید، گرم: سولفات منگنز 0.05، سولفات منیزیم 0.2، سیستئین 0.2، هیدروژن فسفات پتاسیم 2، سیترات آمونیوم 2، استات سدیم 5، گلوکز 20، گلوکز 20، پپتون 1-10 جدا در مقدار کمی آب مقطر داغ)، اتولیز مخمر (به پیوست 2 مراجعه کنید) 50 میلی لیتر، عصاره کبد 100 میلی لیتر. حجم مایع با آب مقطر به 500 میلی لیتر تنظیم می شود و 500 میلی لیتر شیر بدون چربی هیدرولیز شده بوگدانوف که قبلاً استریل نشده است با pH 6.2-6.8 اضافه می شود. محیط فیلتر شده و با بخار جریان کسری استریل می شود.

محیط MRS-2.طراحی شده برای نگهداری در موزه گونه ها لاکتوباسیلوس.تهیه شده بر اساس محیط MRS-1 با افزودن 0.15% آگار. نتیجه یک محیط نیمه مایع است که شرایط بی هوازی بیشتری را در مقایسه با یک مایع ایجاد می کند.

محیط MRS-3.طراحی شده برای "سری های متنوع" هنگام شناسایی باکتری های اسید لاکتیک. این بر اساس محیط MPC-1، اما بدون گلوکز، عصاره کبد و شیر هیدرولیز شده است. کربوهیدرات ها و الکل های پلی هیدریک به مقدار 0.5٪ اضافه می شوند. مقدار آگار اضافه شده 0.15 درصد است. PH محیط 7.0 است. شاخص کلروفنل قرمز (0.004٪) است. شاخص در 1-2 میلی لیتر الکل اتیلیک حل می شود و قبل از استریل شدن به محیط اضافه می شود. کلروفنل قرمز در محدوده pH 4.8-6.4 تغییر رنگ از قرمز بنفش به زرد می دهد.

عصاره کبد

جگر گاو تازه ریز خرد شده و با آب پر می شود (1 کیلوگرم جگر: 1 لیتر آب). به مدت 30 دقیقه بجوشانید و صاف کنید، سپس با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه استریل کنید.

چهارشنبه 10

برای 1 لیتر مخمر آبجو بدون شکر (8٪ DM) یا 1 لیتر آب مخمر، گرم: سولفات منگنز 0.05، سولفات منیزیم 0.2، سیستین یا سیستئین 0.2، پتاسیم هیدروژن فسفات 2، سیترات آمونیوم 0.2، سدیم 0.2، استات اضافه کنید. ساکارز 20، پپتون 10، اتولیز مخمر 50 میلی لیتر. هر جزء به ترتیب مشخص شده در مالت حل می شود (برای لاکتوباسیلوس)یا آب مخمر (برای لوکونوستوک).در مورد اول، pH محیط 5.5 است، در مورد دوم - 6.0. 1.5% آگار را اضافه کرده و با بخار آب استریل کنید. گچ استریل را می توان به ظروف پتری اضافه کرد.

در 150 میلی لیتر آب گوجه فرنگی صاف شده، 0.75 میلی لیتر Tween-80 و 37.5 گرم گلوکز را در حین حرارت دادن حل کنید، 5 میلی لیتر اتولیز مخمر، 600 میلی لیتر شیر بدون چربی (شیر بدون چربی) و 150 میلی لیتر آگار گوشت-پپتون 2 درصد ذوب شده اضافه کنید. . pH روی 7.0 تنظیم شده است. محیط در لوله های آزمایش 6-7 میلی لیتر ریخته می شود، با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه استریل می شود، خنک می شود، با باکتری های اسید لاکتیک مورد مطالعه تلقیح می شود و 1-2 میلی لیتر آگار 2٪ گوشت-پپتون ذوب شده روی آن لایه لایه می شود. . در صورت تشکیل گاز ضعیف، دوشاخه از محیط اصلی جدا می شود، در صورت تشکیل گاز قوی، بالا می رود یا از لوله آزمایش خارج می شود.

محیط کشت باکتری های مخاط ساز

انتخاب 1.گوشت آگار با 10 درصد ساکارز.

گزینه 2.ترکیب، گرم در لیتر: شکر خام 40، سدیم هیدروژن فسفات 2، کلرید سدیم 0.5، سولفات منیزیم 0.1، سولفات آهن 0.01، کربنات کلسیم 10، آگار 20.

چهارشنبه ویتنبری

ترکیب محیط شامل، گرم در لیتر: عصاره گوشت 5، پپتون 5، اتولیز مخمر 50 (یا عصاره مخمر 50)، محلول 1.6٪ از بروموکرزول بنفش 1.4 میلی لیتر، pH 6.8-7.0 است. با بخار روان 3 بار به مدت 45 دقیقه در فاصله زمانی 1 روز استریل کنید.

محیط کشت باکتری های اسپوروژن پوسیدگی

شیر آگار

شیر بدون چربی در لوله های آزمایش 5 میلی لیتری ریخته می شود و با بخار جاری یا در اتوکلاو به مدت 20 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال استریل می شود. به طور جداگانه، آب آگار 3 درصد را آماده کرده، 4-5 میلی لیتر در لوله های آزمایش ریخته و به مدت 30 دقیقه با فشار 0.1 مگاپاسکال استریل کنید. آگار ذوب می شود، به طور استریل با شیر ترکیب می شود و در ظروف پتری ریخته می شود، جایی که نمونه آزمایش قبلاً اضافه شده است.

محیطی برای رشد باکتری های هضم کننده چربی

گزینه I.به 1 لیتر آب 5 گرم پپتون و 3 میلی لیتر اتولیز مخمر اضافه کنید. پس از ایجاد pH 7.2-7.4، 1.5% آگار اضافه کنید. آگار ذوب می شود، محیط صاف می شود و 1٪ چربی شیر داغ یا روغن زیتون به آن اضافه می شود. مخلوط کنید، داخل لوله های آزمایش بریزید و با فشار 0.1 مگاپاسکال به مدت 15 دقیقه استریل کنید.

گزینه 2. 4-2 درصد چربی شیر یا روغن زیتون به پپتون آگار گوشت اضافه می شود. 10 میلی لیتر در لوله های آزمایش ریخته و با فشار 0.1 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه استریل کنید. قبل از افزودن به فنجان ها، محیط را کاملا تکان دهید.

نمونه ای از چنین محیطی ژلاتین با شیر هیدرولیز شده است. 10% ژلاتین به شیر هیدرولیز شده اضافه می شود (می توانید از کازئین هیدرولیز شده یا آبگوشت عصاره گوشت استفاده کنید)، اجازه دهید تا پف کند و با هم زدن تا دمای 50 درجه سانتی گراد گرم شود. PH محیط 7.0-7.2 است. محیط فیلتر شده و در لوله های آزمایش با فشار 0.075 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه استریل می شود.

محیط کشت باکتری اسید استیک

4 حجم را به مالت یا محیط کلم اضافه کنید. % اتیل الکل و 20 واحد در میلی لیتر آنتی بیوتیک مونومایسین که از رشد باکتری های اسید لاکتیک جلوگیری می کند.

محیط کشت بی هوازی

چهارشنبه وینوگرادسکی.در 1 لیتر آب مقطر، گرم: پتاسیم هیدروژن فسفات 1، سولفات منیزیم 0.5، سولفات منگنز 20، گلوکز 20، کلرید سدیم و کلرید آهن حل می شود.

چهارشنبه کیتا تاروزی.تکه های جگر یا گوشت، جوشانده و شسته شده با آب، در لوله آزمایش فرو می روند تا کف آن را بپوشاند. آب گوشت پپتون را با 1% گلوکز (pH 7.2-7.4) به "/ 2 حجم از لوله آزمایش بریزید و شناور را پایین بیاورید. یک لایه روغن وازلین به ارتفاع 1 سانتی متر روی آن بریزید. به مدت 15 دقیقه با فشار 0.1 استریل کنید. MPa 2 بار در فواصل 30 دقیقه.

محیطی برای رشد بی هوازی های گرمادوست که سولفید هیدروژن تولید می کنند

ترکیب محیط شامل، گرم در لیتر: پپتون 10، فروس سولفات 1، آگار 20 است. قبل از پر کردن، یک میخ آهنی تمیز در هر لوله آزمایش قرار می گیرد. پس از بذرپاشی شکر، یک لایه وازلین استریل در لوله آزمایش ریخته می شود. اگر شکر حاوی باکتری های تولید کننده سولفید هیدروژن باشد، کلونی های سیاه مشخص در آگار تشکیل می شوند.