Шеќерна супа и шеќерен агарподготвени со додавање на еден или друг јаглени хидрати во количина од 0,5 до 1% во обична супа или стопен обичен агар. Јаглехидратите се раствораат во мала количина на вода и потоа се додаваат во хранливата средина. Стерилизација на шеќерна супа и агар се врши во апарат Кох 3 дена по ред по 1 час.
Агар со крв, серум или асцитна течностподготвени под строга асепса. 20-25% стерилен серум или асцитна течност или 5-25% стерилна дефибринирана крв се додаваат во готовиот благо алкален агар, се топи и повторно се лади на 45°, се истура во епрувети или ампули. По темелно мешање (да се избегне формирање на меурчиња и пена), агарот во епруветите се коси, а содржината на вијалите се истура во садовите на Хајденрајх. Супа со серум, асцитна течност или крвподготвени на ист начин како агар, но без загревање. За да се контролира стерилноста, супата се става во термостат 48 часа на 37°.

Диференцијални дијагностички хранлив медиум. Состав и цел.

Ендо средина.Подготвен непосредно пред употреба. На 100 ml месен-пептонски агар или агар со супа Хотингер (pH 7,6), стерилно се додава 1 g хемиски чиста лактоза растворена во 5 ml стерилна вода, се лади на 70 ° и се додава мешавина од 0,5 ml заситен раствор на основна фуксин и 1 ,25 ml свежо подготвен 10% раствор на натриум сулфид, протресен и истурен во чаши. За да се исушат, отворените чаши се ставаат во термостат на 37° 30 минути.

На ендо средина, E. coli произведува црвени колонии со метална нијанса, а бактериите од групата тифус-паратифус и дизентерија создаваат безбојни колонии.

Разновидна серија на јаглени хидрати (Хис медиум).Во 100 ml вода додадете 1 g пептон и 0,5 g кујнска сол. Пептонот и солта се раствораат во топла вода неколку минути и се филтрираат низ хартиен филтер (растворот треба да биде целосно бистар). Поставете pH на 7,0. 1% од еден од употребените јаглени хидрати се раствора во наведениот медиум, плови се спуштаат на дното на епруветите за да се фати гас (што укажува на длабоко разградување на шеќерите) и се додава индикатор. Како индикатор се користи следново:

а) тинктура на лакмус - 5 ml на 100 ml медиум. Во кисела средина, тинктурата на лакмусот покажува црвенило, во алкална средина станува сина;

б) азолитмин, кој е прочистен лакмусов препарат, неговата калиумова сол (0,25 g азолитмин се додава на 1 литар медиум);

в) бромотимол блау - на 1 литар медиум, 1 ml 1,6% алкохолен раствор на индикаторот (средината станува зелена, станува сина кога се формира алкал, станува жолта кога се формира киселина);

г) Индикатор Андреде, кој се состои од 1 g киселински фуксин, 400 ml дестилирана вода и 64 ml нормален раствор на натриум хидроксид. Во хранливата средина се додава индикатор од 1%. Медиумот во епрувета треба да добие слама-жолта боја без розова нијанса. Во кисела средина, бојата на медиумот се менува во црвена.

Индикаторот се додава со цел да се утврдат промените во реакцијата на хранливата средина што се случуваат под влијание на ферментација на јаглени хидрати, односно да се идентификува биохемиската активност на микробите. Последново е од големо значење за микробиолошка дијагноза на голем број заразни болести (тифусна треска, дизентерија, колера и др.). Медиумите со јаглени хидрати и индикаторот се истураат во стерилни туби и се стерилизираат фракционо на 100° 3 дена.

Краток шарен ред. Промени за време на растот на E. coli, S. typhi.

Методи за изолирање на чисти култури на аероби.

Дригалски метод

Изолација на чиста култура на анаероби.

Погледнете ги практичните вештини

Виролошки методи. Цел, принцип.

Виролошки метод

Главни фази:

1. Собирање на материјалот за тестирање.

2. Избор врз основа на принципот на цитотропизам и добивање на чувствителен тест систем, одредување на неговата одржливост.

3. Инфекција на избраниот систем.

4. Индикација на вирусот врз основа на откривање на неговата нуклеинска киселина, антигени, хемаглутинин, CPD, подмножества.

5. Идентификација и титрација на вирусот се врши врз основа на:

а) определување на вирусни антигени со помош на имунолошки реакции (RIF, ELISA, RPGA, RSK, RN, VIEF, итн.); б) патохистолошко испитување на органи и ткива; в) CPP; г) клинички симптоми, биолошки тестови (кератоконјуктивална, итн.).

Методи за откривање на вируси

Кога клеточните култури се заразени со вируси, може да се добијат различни видливи манифестации на дејството на вирусот:

1. Цитопатско дејство на вирусот врз клеточната култура (CPE)– појава на видливи морфолошки дегенеративни промени кај него;

2. Стекнување на способност на инфицирана клеточна култура да хемадсорпција– до адсорпција на еритроцити на површината на клеточниот слој;

3. Формирање во заразена клеточна култура под густ слој на специјална обвивка од агар со карактеристична плакети, кои се „негативни колонии“ на вируси;

4. Интрацелуларни подмножества

Класификација на културните медиуми:

Природно– се состојат од производи од животинско или растително потекло и имаат неизвесен хемиски состав. На пример: сокови од зеленчук и овошје, животински ткива, крв, млеко, јајца итн. (ИПА, МПБ).

Полу-синтетички– составот вклучува соединенија од позната хемиска природа и супстанции со непознат состав. На пример: MPB со гликоза, ендо медиум, медиум Sabouraud.

Синтетички– содржат само хемиски чисти соединенија во прецизни концентрации. Се користи во лабораториски експерименти. На пример: средина на Чапек, Омељански, Ушински итн.

Цел на медиумите за култура

Универзална(општа намена) - погоден за одгледување на многу видови на микроорганизми и се користи како основа за специјални хранливи подлоги. Примери: MPB, MPA, Hottinger's медиум, GRM, тиогликолат медиум.

Специјалнисе користи во случаи кога микроорганизмите не растат на едноставни подлоги. Тие вклучуваат крв, серумски агар, супа од сурутка, асцитна супа, асцит агар и други.

1. Изборни средини- некои микроорганизми на нив растат побрзо и поинтензивно од другите видови бактерии. На пример, 1% алкална пептонска вода е изборен медиум за вибриос колера, ру и Лефлеров медиум за патогени на дифтерија.

2. Селективно -благодарение на селективните адитиви (жолчка, бои, антибиотици и сл.) тие се способни да го потиснат развојот на некои видови микроорганизми, но не влијаат на другите видови. Примери: Милеровиот медиум е селективен за тифус-паратифус бактерии, фуразолидон-твен агарот е селективен за коринебактерии и микрококи. Додавањето на антибиотици во медиумот ги прави селективни за габи (на пр. Сабураудовиот медиум итн.).

3. Диференцијална дијагностика- група на медиуми кои овозможуваат да се утврдат биохемиските својства на микроорганизмите и да се разликуваат. Тие се поделени на подлоги за одредување на протеолитички, пептолитички, сахаролитички, хемолитички, липолитички и редукциони својства (Endo, Levin, Ploskirev, Gissa media).

4. Конзерванс (транспорт) -

дизајниран да ја зачува одржливоста на микроорганизмите од моментот на собирање

биоматеријал пред култура за дијагностика

Течност(чорби) - проучување на физиолошки и биохемиски карактеристики и акумулација на биомаса на микроорганизми

Полутечна(1% агар) – складирање на култури и одгледување анаероби

Густи(3-5% агар) – изолација на чисти култури, акумулација, квантитативно евидентирање, проучување на културните својства, антагонистички односи

Масовно– складирање на семе во индустријата (просо, трици)

Сува– произведено од индустријата за подготовка на хранливи подлоги

Транспортен систем со Стјуарт средина

Медиумот на Стјуарт е полуцврста супстрат сиромашна со хранливи материи за зачувување и транспорт на широк спектар на патогени микроорганизми, како на пр. Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Corynebacterium diphteriae, Trichomonas vaginalis, Streptococcus sp., Salmonella sp., Shigella sp.итн. Најсложените микроорганизми опстојуваат во оваа средина повеќе од еден ден, други - до неколку дена.

Присуството на тиогликолат во медиумот ја потиснува ензимската активност на бактериите, а отсуството на азот ја спречува нивната репродукција.

Транспортен систем со животна средина Кери Блер

Транспортниот медиум на Кери Блер е модификација на основниот транспортен медиум на Стјуарт дизајниран специјално за фекални примероци.

Глицерофосфат, кој е метаболит на некои ентеробактерии ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,итн.), заменет со неоргански фосфат,

Метиленско сино беше отстрането и pH на медиумот беше зголемена на 8,4.

Медиумот на Кери Блер овозможува зачувување на повеќето патогени, вклучително и префинети микроорганизми како што се Neisseria sp., Haemophilus sp., Streptococcus sp..

Овој медиум е стандарден за транспорт на анаероби.

Транспортен систем со околина на Ејмс

Транспортниот медиум Ејмс е уште една модификација на основниот транспортен медиум на Стјуарт, во кој глицерофосфатот се заменува со неоргански фосфат, бидејќи глицерофосфатот е метаболит на некои ентеробактерии ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, и др.) и може да го поддржи растот на некои грам-негативни микроорганизми.

Метиленско сино е заменето со фармацевтски активен јаглен.

Калциум и магнезиум беа додадени во медиумот за да се одржи пропустливоста на бактериските клетки.

Оваа средина е способна да поддржува микроорганизми како што се Neisseria sp., Haemophilus sp., Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceaeитн., меѓутоа, најдобри резултати се добиваат со одгледување во првите 24 часа.

Универзални средства за збогатување: месен пептон агар (MPA) и супа од месен пептон (MPB)

Тие се главниот медиум за инокулација на микроорганизми за проверка на чистотата на културите пред биохемиски и серотипизирање.

Тие се користат за одгледување и броење на непретенциозни микроорганизми. Во полутечна форма, медиумот може да се користи за складирање на контролни (референтни) микроорганизми.

Универзални средини за складирање Hottinger околина

Дизајниран за одгледување на различни микроорганизми, како што се ентеробактерии, Pseudomonas aeruginosa, стафилококи и некои видови на стрептококи. Доколку е потребно, може да се збогати со јаглехидрати и соли.

Содржи хидролиза на Хотингер, кој се добива со ензимска хидролиза на мелено месо (говедско) со панкреатин, проследено со филтрација и додавање на хлороформ како конзерванс.

Универзални средини за складирање:Животна средина на Мулер-Хинтон

Овој медиум се користи за одгледување Neisseria sp.и да се утврди чувствителноста на микроорганизмите на антимикробни агенси.

Среда Меконки

Медиумите MacConkey се препорачуваат како диференцијални медиуми за селективна изолација на ентеробактериите и сродните грам-негативни бацили.

Лактоза-позитивните соеви растат со розови или црвени колонии кои може да бидат опкружени со зона на таложење на жолчни соли.

Црвената боја се појавува како резултат на закиселување на медиумот со производи на распаѓање на лактоза (кога pH паѓа под 6,8) и адсорпција на неутрално црвено.

Видовите кои не ферментираат лактоза (Shigella, Salmonella) обично формираат транспарентни, безбојни колонии и не ја менуваат околината.

Диференцијални дијагностички средини:Ендо медиум

Овој медиум е развиен од Ендо како медиум за култура за диференцијација на микроорганизми кои ферментираат и неферментираат лактоза. Се користи за микробиолошко испитување на вода, отпадни води, млечни и други прехранбени производи.

Натриум сулфитот и основниот фуксин имаат инхибиторно дејство врз грам-позитивните микроорганизми. Лактозата се разложува од микроорганизми до алдехид и киселина. Алдехидот, пак, ослободува фуксин од комплексот фуксин-сулфит, подобрувајќи ја црвената боја на колониите. Кај E. coli оваа реакција е многу изразена и е придружена со кристализација на фуксин, која се манифестира со зеленикав метален сјај (muchsin gloss) на колониите.

Диференцијални дијагностички средини:Жолчка сол агар

Овој медиум се користи како селективен медиум за изолирање на клинички значајни стафилококни култури.

Манитолот е супстрат што може да ферментира и разликува, како и извор на јаглерод.

Додавање (до 5% v/v) на емулзија од жолчка од јајце овозможува да се одреди липазната активност на микроорганизмите. Емулзијата во солена средина станува транспарентна, затоа, во присуство на активност на липаза, се формира жолта непроѕирна зона околу колониите.

Диференцијални дијагностички средини:Вилсон-Блер или бизмут сулфитен агар

Селективен медиум за изолација на салмонела.

Пептичен дигест на животинско ткиво и екстракт од месо служи како извор на азотни хранливи материи, јаглерод, сулфур, витамини од групата Б и елементи во трагови неопходни за растот на овие бактерии.

Брилијантното зелено го инхибира растот на сите грам-позитивни бактерии. Гликозата е ферментирачки јаглени хидрати. Железниот сулфат може да открие производство на водород сулфид.

Бизмутот е тежок метал кој го инхибира растот на повеќето грам-негативни цревни бактерии освен салмонела.

Салмонелата го редуцира железен сулфат во присуство на гликоза и бизмут сулфит до железен сулфид, што ги претвора нивните колонии црни.

Специјални изборни средини:Околината на Лофлер

Овој медиум со додавање на коњски серум се користи за одгледување Corynebacterium diphtheriaeод клинички материјал и субкултури на чисти култури на овие микроорганизми.

Високата серумска концентрација помага да се одреди протеолитичката активност на микроорганизмите, како и формирањето на пигменти. Пептон и екстракт од месо обезбедуваат микроорганизми со есенцијални хранливи материи. Гликозата е ферментирачки супстрат и извор на енергија.

Специјални селективни медиуми:Кампилобакагар

Селективен медиум за Campylobacter кој се состоеше од база на крвен агар со овча или коњска крв и антибиотици.

Антимикробните компоненти значително го инхибираат растот на нормалната микрофлора, промовирајќи го растот и излачувањето од изметот Campylobacter fetus ssp. јејуни.

Присуството на амфотерицин Б во додатокот значително или целосно го потиснува растот на габите; цефалотинот воведен подоцна ја подобрува супресијата на нормалната цревна микрофлора.

Колонии Campylobacter fetus ssp. јејуниимаат мукозен карактер, рамно сив со неправилни контури или подигнат, кружен, без хемолиза.

Некои соеви може да произведат жолто-кафеави или розеви колонии.

На влажна површина на медиумот може да се појави спојување или преполнување.

Изборните медиуми беа воведени во микробиолошката практика од С.Н. Виноградски и М. Бејеринк. Тоа се хранливи подлоги во кои со додавање на едно или повеќе хемиски соединенија се создаваат оптимални услови за раст и репродукција на еден вид микроорганизми (или група сродни микроорганизми) и неповолни услови за сите други. Таквите медиуми се користат главно за изолирање на чиста култура на микроорганизми од нивните природни живеалишта и за акумулирање на маса култури (хемиски метод за изолирање чиста култура). На пример, хранлив медиум, кој е коагулиран коњски серум, е селективен медиум за бактерии на дифтерија, алкална пептонска вода за Вибрио колера, жолчка супа за предизвикувачкиот агенс на тифусна треска, супа од црниот дроб за бруцела итн.

Акумулацијата на микробите во селективни хранливи медиуми во многу случаи служи како важен прелиминарен чекор во изолацијата на чистите култури од оригиналните материјали за тестирање (на пример, Vibrio cholerae или тифусна бактерија од измет на пациенти или носители итн.).

Што разбирате под диференцијални хранливи материи?

Диференцијални дијагностички медиуми се оние кои содржат, покрај супстанции кои обезбедуваат раст и развој на микроорганизми, супстанции кои се користат како супстрат за одредени ензими. Врз основа на квалитативната промена во подлогата, се одредува присуството на одреден ензим (проценето со помош на индикатор кој реагира на присуството на производи за распаѓање на подлогата во хранливата средина).

Секој тип на микроорганизми се карактеризира со прилично стабилен сет на ензими. Одредувањето на збир на ензими со помош на диференцијални дијагностички медиуми овозможува да се разликуваат видовите на микроорганизми. На пример, крвниот агар ви овозможува да го откриете ензимот хемолизин, Неговиот медиум - сахаролитички ензими (јаглехидрати), желатин се користи за да се земат предвид протеолитичките својства на микробите итн.

Крвен агар. Присуството на ензимот хемолизин се оценува со уништување на црвените крвни зрнца и формирање на лесна зона околу микробите кои се одгледуваат на крвен агар.

Неговите медиуми. Присуството на ензими - јаглехидрати, кои ги разградуваат јаглехидратите во киселина, се покажува со промена на рН на медиумот кон киселата страна и промена на бојата на хранливата средина. Разликата во множеството ензими може да се користи за проверка на чистотата на изолираната култура, како и за брзо разликување на еден вид од другите за време на првичното проучување на инокулации на заразен материјал.

Хемиски реагенси

1. Што се хемиски реагенси и за што се користат?

Хемиски реагенси- супстанции кои се користат во лабораториската пракса за спроведување на различни хемиски реакции.

Во повеќето случаи, хемиските реагенси се индивидуални супстанции, но доста често тие имаат сложен состав. Не постои општо прифатена класификација на хемиски реагенси, најчесто тие се поделени на аналитички хемиски реагенси и сè друго.

2. Во ветеринарната медицина, за кои цели се користат?

Во ветеринарната медицина, хемиските реагенси се користат за аналитички и дијагностички цели во клинички, ветеринарно-санитарни, хигиенски, стручни, биохемиски и други лабораториски студии. Истражувачките методи кои се користат и развиени во биолошката и клиничката пракса бараат широк опсег на хемиски реагенси кои мора да задоволат широк спектар на барања. На пример, клиничките и биохемиските студии бараат високо прочистени супстрати за ензими, самите ензими, реагенси за специфични групи (SH, NH3, COOH групи, итн.) итн. За спроведување на неоргански и органски синтези, како и за квалитативни и квантитативни анализи, вкл. при ветеринарна и санитарна контрола во различни индустрии, анализа) на лекови, при спроведување на ветеринарни, санитарни и хигиенски анализи на прехранбени производи, воздух, вода итн., Се користат голем број на широк спектар на високо прочистени хемиски реагенси.

1.По составхранливите медиуми се поделени на едноставни и сложени

Постои група средини за општа намена - едноставни. Оваа група вклучува супа од месо-пептон (едноставна хранлива супа), месо-пептон агар (едноставен хранлив агар), хранлив желатин. Овие медиуми се користат за одгледување на многу патогени микроби. Медиумите за општа намена, или едноставните хранливи материи, обично се подготвуваат од хидролизати со додавање на пептон и натриум хлорид. Тие се користат и како основа за подготовка на сложени медиуми.

Исто така, според нивниот состав се разликуваат протеини, без протеини и минерални медиуми.

2. По потеклосредини се поделени на вештачки и природни (природни).

Природните хранливи материи може да содржат компоненти од животинско (на пример, крв, серум, жолчка) или растително (на пример, парчиња зеленчук и овошје).

3.Според целтаалоцираат конзерванс медиум(за примарна сеидба и транспорт), опкружување за збогатување(за акумулација на одредена група бактерии), културни медиуми(универзално едноставни, сложени специјални и за формирање на токсини), медиум за изолација и акумулација (конзерванс, збогатување и селективен) и средина за идентификација(диференцијален и изборно-диференцијален).

Медиуми за култура на конзервансиспречување на смртта на патогени и го потиснува растот на сапрофитите. Најмногу се користат мешавина од глицерин, хипертоничен раствор, глицерин конзерванс со LiCl 2, раствор од натриум цитрат и натриум деоксихолат.

Медиуми за збогатување бактерии

Медиуми за збогатување(на пример, медиум Kitta-Tarozzi, супа од селенит, тиогликолат медиум) се користат за акумулирање на одредена група бактерии преку создавање услови кои се оптимални за некои видови, а неповолни за други. Најчесто како такви средства се користат разни бои и хемикалии - жолчни соли, Na+ тетратионат, К телурит, антибиотици, фуксин, гентио виолетова, блескаво зелена итн.

Исто така со закажување прави разлика помеѓу средини изборна, специјална и диференцијална дијагностика.

Изборни средини (селективна, селективна, акумулација, збогатување).Принципот на создавање на селективни хранливи подлоги се заснова на задоволување на основните биохемиски и енергетски потреби на типот на микроб за кој се наменети за одгледување или на додавање на инхибитори кои го потиснуваат растот на придружната микрофлора. Одреден состав и концентрација на хранливи материи, микроелементи, фактори на раст со строго дефинирана pH вредност или додавање на инхибитори обезбедуваат оптимални услови за одгледување на еден или неколку видови микроорганизми. Кога на нив се сее материјал кој содржи мешавина од различни микроби, прво ќе се појави растот на видовите за кои околината ќе биде селективна. Примери за изборни средства се жолчката супа, селенитната супа, медиумот на Плоскирев - за одгледување микроби од цревната фамилија, алкалната пептонска вода - за Vibrio cholerae.

Жолчка супа. Во МПБ се додава 10-20% волова жолчка. Жолчката го потиснува растот на коките и воздушната флора, но е поволна за пролиферација на салмонела.

Супа од селенит. Се состои од фосфатна супа со додавање на натриумова сол на селенит, која е инхибитор на растот на кокната флора и ешерихија коли, но не го инхибира растот на салмонела.

Среда Плоскирева. Густа средина која содржи инхибитори на E. coli, coli, но поволна за растот на Shigella и Salmonella, чија репродукција не е инхибирана од брилијантните зелени и жолчните соли.

Пептонска вода. Содржи 1% пептон и 0,5% натриум хлорид. Околината е селективна за Vibrio cholerae, бидејќи тие се размножуваат подобро од другите бактерии во „гладни средини“, особено со алкална реакција, бидејќи тие самите лачат кисели отпадни производи.

Специјални средини.Неопходни за одгледување бактерии кои не растат на едноставни хранливи подлоги. За некои организми, неопходно е да се додадат јаглени хидрати, крв и други дополнителни хранливи материи во едноставните хранливи материи. Примери на едноставни хранливи материи се шеќерна супа и шеќерен агар за стрептокока (подготвени од MPB и MPA, соодветно, на кои се додава 0,5-2% гликоза).

Диференцијални дијагностички срединисе користи за одредување на видот на микробот што се проучува, врз основа на карактеристиките на неговиот метаболизам. Според нивната намена, диференцијалните дијагностички средини се поделени на следниов начин:

1. Медиуми за откривање протеолитичка способностмикроби кои содржат млеко, желатин, крв итн.

2. Медиуми со јаглени хидрати и полихидрични алкохоли за откривање на различни сахаролитички ензими.

Следниве индикатори се додаваат во составот на диференцијалните дијагностички медиуми дизајнирани да ги идентификуваат сахаролитичките својства и редокс ензимите: неутрално црвено, киселинско фуксин, бромотимол сино, водено сино со розолинска киселина (БП). Со менување на неговата боја при различни pH вредности, индикаторот укажува на присуство на ензим и разградување на состојката внесена во медиумот.

Примери на диференцијални дијагностички средини:

Ендо медиум. Се состои од МПА со додавање на 1% лактоза и основен фуксин (индикатор) обезбојуван со натриум сулфит. Ендо медиумот има малку розова боја. Се користи во дијагнозата на цревни инфекции за да се разликуваат бактериите кои ја разградуваат лактозата за да формираат кисели производи од бактерии кои ја немаат оваа способност. Колониите на лактоза-позитивни микроби (Escherichia coli) се црвени поради намалувањето на фуксинот. Колониите на лактоза-негативни микроорганизми - салмонела, шигела итн. - се безбојни.

Диференцијалните дијагностички средини вклучуваат кратки и продолжени шарен ред. Се состои од медиум со јаглени хидрати (Hiss media), MPB, млеко и месо-пептон желатин.

Хис медиумисе подготвуваат врз основа на пептонска вода, во која се додаваат хемиски чисти моно-, ди- или полисахариди (гликоза, лактоза, скроб итн.).

За откривање на поместувања на pH како резултат на формирање на киселини и распаѓање на јаглени хидрати, се додава индикатор на медиумот. Со подлабоко распаѓање на јаглехидратите, се формираат гасовити производи (CO 2, CH 4, итн.), кои се заробуваат со помош на плови - мали епрувети спуштени наопаку во медиумот. Медиумите со јаглени хидрати може да се подготват и како густи подлоги со додавање на 0,5-1% агар-агар. Тогаш формирањето на гас се детектира со формирање на меурчиња (кршења) во колоната на медиумот.

На MPB, кој е дел од шарената серија, се наоѓаат производи формирани при разградување на амино киселини и пептони (индол, водород сулфид). Хидроген сулфидсе открива со ставање на лента филтер-хартија натопена во раствор од олово ацетат во MPB по сеидбата на културата. Кога амино киселините што содржат сулфур се разградуваат, се ослободува водород сулфид, а хартијата поцрнува поради формирањето на оловниот сулфид. За одредување индолможете да користите сложен индикатор. Индолот се формира со разградување на триптофан и може да се открие кога овој индикатор ќе се додаде во култура одгледувана на MPB. Во присуство на индол, MPB станува зелено или сино.

Во практични бактериолошки лаборатории тие се широко користени микро и експресни методиза индикативно проучување на биохемиските својства на микроорганизмите. Постојат многу системи за тестирање за оваа намена. Најчесто користен систем на индикатори (НИБ). SIB се дискови од филтер-хартија импрегнирани со раствори на шеќери или други супстрати во комбинација со индикатори. Таквите дискови се спуштаат во епрувета со култура одгледувана во течен хранлив медиум. Промената на бојата на дискот со подлогата се користи за да се процени функционирањето на ензимот. Системите за микро-тест за проучување на идентификацијата на ентеробактериите се претставени со пластични садови за еднократна употреба со медиуми што содржат различни супстрати со додавање индикатори. Сеење чиста култура на микроорганизми во такви системи за тестирање ви овозможува брзо да ја идентификувате способноста на бактериите да користат цитрати, гликоза, сахароза, ослободување на амонијак, индол, разградување на уреа, лизин, фенилаланин итн.

СПЕЦИЈАЛНИ (ИЗБОРНИ) МЕДИУМИ ЗА ИСХРАНА

Медиуми за раст на квасец

Синтетички читач медиум

Составот на медиумот вклучува, g/l: амониум сулфат 3, магнезиум сулфат 0,7, калциум нитрат 0,04, натриум хлорид 0,5, калиум дихидроген фосфат 1,0, калиум хидроген фосфат 0,1. Почетна pH вредност 6,6. Калциум нитрат, кој не го користи квасецот, може да се изостави од медиумот. За проучување на репродукција на квасец, додадете 2% шеќер, за проучување на ферментација - 5-10%. Комплетниот синтетички медиум содржи кристални витамини, mcg/ml: инозитол 5, биотин 0,0001, пантотенска киселина 0,25, тиамин 1,0, пиридоксин 0,25, никотинска киселина 0,5. Стерилизирајте го медиумот во автоклав под притисок од 0,1 M Pa за 20 минути.

Гликоза-амониумски медиум

Ги содржи во 1 литар вода од чешма следните супстанции, g: амониум сулфат 5, калиум дихидроген фосфат 0,85, калиум хидроген фосфат 0,15, магнезиум сулфат 0,5, натриум хлорид 0,1, калциум хлорид 12, богат со фактори на раст се додава квасец (0,2%) или екстракт од месо (0,3%) и сок од грозје.

Синтетички медиум за идентификување на несовршени квасци

Во 1 литар вода од чешма ги содржи следните материи, g/l: гликоза 50, лизин 3, калиум дихидроген фосфат 1, магнезиум сулфат 1, железо сулфат - траги. Секоја компонента се раствора во вода посебно и се додава по наведениот редослед. Во медиумот се додава агар (1,5%), се топи, се истура во епрувети и се стерилизира 20 минути на притисок од 0,05 MPa.

Комплетен медиум со лизин за откривање на несовршени квасци

Ги содржи во 1 литар вода од чешма следните супстанции, g/l: гликоза 50, магнезиум сулфат 1, калиум дихидроген фосфат 2, калиум лактат 12 ml (50% раствор), /, (+) лизин монохидрат 1, витамински раствор (по Додадете 100 ml стерилна дестилирана вода, g: инозитол 2, калциум пантотенат 0,4, никотинамид 0,5, хидратиамин 0,1, агар 20, pH на медиумот - 5-5,2. Медиумот се прелива во епрувети од 15 ml во епрувети и 1 стер. притисок од 0,1 MPa.

Ацетатен медиум за откривање на несовршени квасци

За 1 литар вода од чешма се земаат 10 g натриум ацетат, 10 g амониум хлорид, 5 g гликоза, 3 ml автолизат од квасец, се прелива во епрувети од 5 ml и се стерилизира на притисок од 0,05 MPa 30 минути.

Медиум за идентификација на странски квасци морфолошки сличен на главната култура

10 g пептон, 2 g калиум хидроген фосфат се раствораат во 500 ml дестилирана вода и се филтрираат. 15 g агар се топат во филтратот, 10 g гликоза, 0,4 g еозин и 0,065 ml метиленско сино (90% раствор на алкохол) се додаваат, се прилагодува на 1000 ml со топла дестилирана вода, се истура во епрувети и се стерилизира за 15 минути при притисок од 0, 1 MPa. Кога се стерилизира, бојата исчезнува, кога се лади, повторно се појавува. Медиумот се чува не повеќе од 2 месеци.

Медиум за формирање на псевдомицелиум

Гликозен пептон агар.На 1 литар вода од чешма додадете г: пептон 10, гликоза 20, агар 30-35. Стерилизирајте 30 минути под притисок од 0,05 MPa. Доколку е потребно, можете да додадете екстракт од квасец или месо (0,5%) или да готвите во течна форма.

Агар од компир. 100 g излупени, измиени, тенко исечени компири се ставаат на ладно место неколку часа со 300 ml вода од чешма. Екстрактот се филтрира, 230 ml од екстрактот се доведуваат до 1 литар со вода од чешма, се додаваат 20 g гликоза и 30-35 g агар, се топи и се стерилизира 1 час на притисок од 0,075 MPa.

Вода од квасец со јаглени хидрати („серија на бои“)

Способноста на квасецот да предизвика ферментација на јаглени хидрати се одредува со користење на квасец вода со 2% од испитуваниот шеќер (гликоза, малтоза, сахароза, лактоза, рафиноза итн.). Медиумот се истура во епрувети со плови, Dunbar цевки и се стерилизира со фракционо тече пареа. Резултатите по сеидбата се запишуваат по 2 дена, по потреба и по 7 дена одгледување на температура од 30 °C.

Способноста на квасецот да ги метаболизира јаглехидратите со оксидација се проучува на медиум од следниот состав, r/l: амониум сулфат 5, калиум дихидроген фосфат 1, магнезиум сулфат 0,5, автолитат 1, тест шеќер 10, агар 20. Медиумот се истура во епрувети, стерилизирани 30 минути под притисок од 0,05 MPa, подгответе коси агар. Растот на културата се проценува по 3-4 дена.

Агар од квасец со шеќер

0,5% натриум хлорид, 1% гликоза (или 4 или 10% сахароза) и 2% агар се раствораат во вода од квасец, pH 6,8 (со гликоза) и 6-6,5 (со сахароза). Медиумот се истура во епрувети или колби и се стерилизира на притисок од 0,05 MPa 30 минути.

Антибиотски медиуми

За преференцијален развој на квасец и сузбивање на придружните бактерии, антибиотиците со широк спектар се воведуваат во медиумите: стрептомицин (100 единици / ml), пеницилин (20-100 единици / ml), левомицин (50 mg / l), неомицин ( 20 единици/ml) и сл. Тие можат да се додадат во околината или заедно или одделно.

Медиуми за формирање на аскоспори

Среда Городкова.Содржи во 1 литар вода од чешма, g: пептон 10, натриум хлорид 5, гликоза 1 (или 2,5), агар 20; рН на околината е 7,3. Истурете во епрувети и стерилизирајте 15 минути под притисок од 0,1 MPa.

Мекклари ацетатен агар.На 1 литар дестилирана вода додадете g: натриум ацетат 8,2, калиум хлорид 1,8, гликоза 1, екстракт од квасец 2,5, агар 15. Автоклавирајте 15 минути на притисок од 0,1 MPa.

Среда Старки.Во 1 литар вода од чешма се раствора g: калиум хидроген фосфат 1, калиум дихидроген фосфат 0,25, магнезиум сулфат 0,25, калциум хлорид 0,05, агар 20. Стерилизирајте на притисок од 0,05 MPa.

Осмофилен медиум за раст на квасец

На 1 литар гликозен сируп (50-60% ДМ) додадете 5 g пептон и 20 g агар. Пептон може да се замени со квасец вода (50 ml). Стерилизирајте под притисок од 0,05 MPa.

Меласа кантарион

200-300 g густа меласа се мешаат со вода во сооднос 1: 3, се загрева на температура од 95 ° C и се остава да отстои 2 часа. . Во растворот се додава 3% дијамониум фосфат, се разредува со вода до 5-8% ДМ и се истура во епрувети или колби. За да подготвите медиум за агар, додадете 1,5-2% агар. Стерилизирајте под притисок од 0,05 MPa 30 минути во автоклав или фракционо 1 час со интервал од 20-24 часа 3 пати.

Медиуми за одгледување филаментозни габи

Агар од репка

Добро измиената шеќерна репка се сече на парчиња, се полни со вода од чешма (20 гр цвекло на 1 литар вода) и се вари 30 минути. Филтратот се доведува до оригиналниот волумен со вода, се додава 2% агар и се стерилизира на притисок од 0,1 MPa 30 минути.

Пулпа од репка

Чистата репка се меле на ренде, се става во петриеви садови и без превртување се стерилизира на притисок од 0,1 MPa 30 минути.

Среда Чапек

Состав на медиумот, g/l: сахароза или гликоза 30, калиум дихидроген фосфат 1,0, натриум нитрат 2,0, магнезиум сулфат 0,5, калиум хлорид 0,05, железен сулфат 0,1, претходно земени состојки од агар и агар 20. растворени во 1 литар дестилирана вода, се загреваат со течна пареа, а рН се прилагодува на 4,0-5,5 со 10% раствор на лимонска киселина или натриум хидроксид. Се филтрира, се истура во епрувети и се стерилизира со фракционално протечна пареа 3 пати по 30 минути со интервал од 1 ден.

Czapek-Dox шеќер нитрат агар

Опција 1.За 1 литар дестилирана вода земете g: сахароза 20, калиум хидроген фосфат 0,5, магнезиум сулфат 0,5, натриум хлорид 0,5, калиум нитрат 1, траги од железо сулфат, калциум карбонат 2-5, агар 20.

Опција 2. За 1 литар дестилирана вода земете g/l: сахароза 30, амониум нитрат 2,5, калиум дихидроген фосфат 1, магнезиум сулфат 1, железен сулфат 0,01, агар 20.

Медиум за гликоза-скроб

Истите компоненти на сол како во сахароза нитрат агар на Чапек, но наместо сахароза, се земаат 25 g растворлив скроб и 5 g гликоза.

Скроб амониум агар

Состав на медиумот, g/l: растворлив скроб 10, калциум карбонат 3, калиум хидроген фосфат 1, магнезиум сулфат 1, натриум хлорид 1, амониум сулфат 1, агар 20. Стерилизирајте 30 минути на притисок од 05 MPa.

Среда Сабуро

Во 100 ml стерилна вода од квасец додадете g: пептон 5, гликоза 4, агар 1,8-2. Стерилизирајте 20 минути под притисок од 0,05 MPa или фракционо.

Основата на овој медиум е квасец вода. За подготовка на вода од квасец, 70-100 g свеж цеден квасец (7-10 g сув квасец) се варат 20-30 минути во 1 литар дестилирана вода и се оставаат во висок цилиндар на ладно 12 часа. течноста се преточува, се додава уште 1. л вода, се вари 30 минути, се филтрира, се прилагодува pH вредноста на потребната вредност. Подготвениот медиум се стерилизира во чекори од 2-3 минути по 20 минути со интервал од 1 ден. Во 100 ml стерилна вода од квасец се додава 1% пептон, 2% агар, по растворањето на агарот се додава 4% гликоза или малтоза, се филтрира, се истура во епрувети и се стерилизира на притисок од 0,05 MPa 20 минути.

Медиумот може да се подготви и со користење на обична 1% пептонска вода.

Медиуми за одгледување бактерии на млечна киселина

Хидролизирано млеко (според Богданов)

Редовното или обезмастено млеко (pH 7,6-7,8) се вари 5 минути, садот темелно се протресува и се лади на температура од 45 ° C и се додава 0,5-1 g панкреатин на 1 литар, по 4-7 минути се додава 5 ml хлороформ. Ставете во термостат 18-20 часа на температура од 40 °C. Панкреатинот во прав треба претходно да се разреди во мала количина топла вода. Во текот на првите часови млекото се промешува неколку пати со отворен затворач. Хидролизираното млеко се филтрира преку хартиен филтер, се разредува 2-3 пати со вода, pH се поставува на 7,0-7,2 и се стерилизира 15 минути на притисок од 0,1 MPa или 20 минути на притисок од 0,05 MPa.

Хидролизиран млечен агар

Во хидролизираното млеко се додава 1,5-2,0% агар. Смесата се загрева до вриење и се чува додека агарот целосно не се раствори. Топлата средина се филтрира преку памучен филтер, се истура во епрувети или колби и се стерилизира на притисок од 0,1 MPa 10-15 минути.

Обезмастено млеко со индикатор

Свежото обезмастено млеко загреано до вриење се затемнува додека е топло со тинктура од лакмус до интензивна јоргована боја. Стерилизирајте со проточна пареа (3 пати по 30 минути со интервал од 1 ден) или со автоклавирање 10 минути на притисок од 0,1 MPa.

Слад кантарион со потрошено жито

Се подготвува слад кантарион, но без одвојување на потрошеното зрно (12-15% ДМ). Истурете во епрувети, додадете стерилна креда (2-4%) и стерилизирајте на притисок од 0,05 MPa 30 минути.

Квасец сахароза агар

Да идентификува ЛактобацилусИ Leuconostocкористете медиум подготвен на база на вода од квасец со додавање на 0,5% натриум хлорид, 10% сахароза и 2% агар; рН на околината е 6-6,5.

Медиум за никнување

25 g никулци од слад (јачмен) се варат 10 минути со 500 ml вода и, откако ќе се оладат на температура од 45-50 ° C, се филтрираат низ ленена кеса, се прочистуваат со претепан пилешки протеин, се варат повторно и се филтрира низ хартиен филтер за отстранување на коагулиран протеин. 1,5% пептон, 2% шеќер, 2% агар се додаваат во растворот и се стерилизираат 30 минути под притисок од 0,05 MPa.

Зелка среда

200 гр сечкана бела зелка се прелива во 1 литар вода, се вари 10 минути, се исцеди низ два слоја газа. Добиената течност се филтрира низ превиткан филтер, се разредува 2 пати и во лушпата се додава 2% гликоза и 1% пептон, се истура во епрувети и се стерилизира на притисок од 0,05 MPa 15 минути. За да добиете цврст медиум, додадете 2% агар.

MRS медиум (de Man's media)

Составот на медиумот вклучува, g/l: манган сулфат 0,05, магнезиум сулфат 0,2, калиум хидроген фосфат 2, амониум нитрат 2, натриум ацетат 5, пептон 10, екстракт од квасец Дифко 5, екстракт од месо 10, гликоза-2 1 ml, средна pH 6-6,5. Медиумот се филтрира и стерилизира во фракционо чекори од 30 минути 3 пати со интервал од 1 ден или во автоклав на притисок од 0,05 MPa 20 минути. Се користи во течна, полутечна и агар форма за породување LeuconostocИ Лактобацилус.

MRS media (изменето од A.A. Lanzier)

MRS-1 средина.Растворете во 200 ml дестилирана вода, g: манган сулфат 0,05, магнезиум сулфат 0,2, цистеин 0,2, калиум хидроген фосфат 2, амониум цитрат 2, натриум ацетат 5, гликоза 20, т. во мала количина топла дестилирана вода), автолизат од квасец (види Додаток 2) 50 ml, екстракт од црн дроб 100 ml. Волуменот на течноста се прилагодува на 500 ml со дестилирана вода и се додаваат 500 ml хидролизирано обезмастено млеко на Богданов, претходно не стерилизирано, pH 6,2-6,8. Медиумот се филтрира и се стерилизира со фракционо течна пареа.

MRS-2 средина.Дизајниран за музејско складирање на соеви Лактобацилус.Подготвен на база на медиум MRS-1 со додавање на 0,15% агар. Резултатот е полу-течен медиум, кој создава повеќе анаеробни услови во споредба со течниот.

MRS-3 средина.Дизајниран за „разновидна серија“ при идентификување на бактерии на млечна киселина. Се базира на медиумот MPC-1, но без гликоза, екстракт од црн дроб и хидролизирано млеко. Јаглехидратите и полихидричните алкохоли се додаваат во количина од 0,5%. Количината на додадена агар е 0,15%. pH на околината е 7,0. Индикаторот е црвен хлорофенол (0,004%). Индикаторот се раствора во 1-2 ml етил алкохол и се додава во медиумот пред стерилизација. Црвениот хлорофенол дава премин на боја од црвено-виолетова во жолта во опсегот на pH од 4,8-6,4.

Екстракт од црниот дроб

Свежиот говедски црн дроб се сече ситно и се полни со вода (1 кг црн дроб: 1 литар вода). Се вари 30 минути и се филтрира, а потоа се стерилизира на притисок од 0,05 MPa 20 минути.

Среда 10

За 1 литар неизматена пивска кантарион (8% ДМ) или 1 литар вода од квасец додадете г: манган сулфат 0,05, магнезиум сулфат 0,2, цистин или цистеин 0,2, калиум хидроген фосфат 2, амониум цитрат натриум 0,2 ацетат 0,2 а. сахароза 20, пептон 10, автолизат од квасец 50 ml. Секоја компонента се раствора во наведениот редослед во кантарион (за Лактобацил)или вода од квасец (за Leuconostoc).Во првиот случај, pH на околината е 5,5, во вториот - 6,0. Додадете 1,5% агар и стерилизирајте со течна пареа. Во јадењата Петри може да се додаде стерилна креда.

Во 150 ml филтриран сок од домати, растворете 0,75 ml Tween-80 и 37,5 g гликоза додека се загрева, додадете 5 ml автолизат од квасец, 600 ml обезмастено млеко (обезмастено млеко) и 150 ml стопен 2% месен-пептонски агар. . рН е поставена на 7,0. Медиумот се истура во епрувети од 6-7 ml, се стерилизира на притисок од 0,05 MPa 20 минути, се лади, се инокулира со проучуваните млечно киселински бактерии и одозгора се наложува 1-2 ml стопен 2% месо-пептонски агар. . Во случај на слабо формирање на гас, приклучокот е одвоен од главниот медиум, во случај на силно формирање на гас, тој се крева високо или излетува од епрувета.

Медиуми за одгледување бактерии кои формираат слуз

Опција 1.Месен агар од месо со 10% сахароза.

Опција 2.Состав, g/l: суров шеќер 40, натриум хидроген фосфат 2, натриум хлорид 0,5, магнезиум сулфат 0,1, железен сулфат 0,01, калциум карбонат 10, агар 20.

Среда Витенбери

Составот на медиумот вклучува, g/l: екстракт од месо 5, пептон 5, автолизат од квасец 50 (или екстракт од квасец 50), 1,6% раствор на бромокрезол виолетова 1,4 ml, pH 6,8-7,0. Стерилизирајте со проточна пареа 3 пати по 45 минути со интервал од 1 ден.

Медиуми за одгледување гнили аспорогени бактерии

Млечен агар

Обезмастеното млеко се истура во епрувети од 5 ml и се стерилизира со течна пареа или во автоклав 20 минути на притисок од 0,05 MPa. Одделно, подгответе 3% воден агар, истурете 4-5 ml во епрувети и стерилизирајте 30 минути под притисок од 0,1 MPa. Агарот се топи, стерилно се соединува со млеко и се истура во петриеви садови, каде што претходно е додадена пробната мостра.

Медиуми за одгледување бактерии што ги варат мастите

Опција I.Во 1 литар вода додадете 5 g пептон и 3 ml автолизат од квасец. По воспоставување на pH од 7,2-7,4, додадете 1,5% агар. Агарот се топи, медиумот се филтрира и се додава 1% топла млечна маст или маслиново масло. Се меша, се истура во епрувети и се стерилизира на притисок од 0,1 MPa 15 минути.

Опција 2. 2-4% млечна маст или маслиново масло се додаваат во месен пептон агар. Истурете 10 ml во епрувети и стерилизирајте под притисок од 0,1 MPa 20 минути. Темелно протресете го медиумот пред да го додадете во чашите.

Пример за таков медиум е желатин со хидролизирано млеко. Во хидролизираното млеко се додава 10% желатин (можете да користите хидролизиран казеин или супа од екстракт од месо), оставете го да набабри и загрее со мешање до температура од 50 °C. рН на околината е 7,0-7,2. Медиумот се филтрира и се стерилизира во епрувети под притисок од 0,075 MPa 20 минути.

Медиуми за одгледување бактерии на оцетна киселина

Додадете 4 вол. во кантарион или медиум од зелка. % етил алкохол и 20 единици/ml антибиотик мономицин, кој го инхибира растот на бактериите на млечна киселина.

Медиуми за одгледување анаероби

Виноградски среда.Во 1 литар дестилирана вода се раствораат g: калиум хидроген фосфат 1, магнезиум сулфат 0,5, манган сулфат 20, гликоза 20, натриум хлорид и железен хлорид - траги.

Среда Кита-Тароци.Парчиња црн дроб или месо, варени и измиени со вода, се спуштаат во епрувета така што ќе го покријат дното. Истурете супа од месо-пептон со 1% гликоза (pH 7,2-7,4) до "/ 2 тома од епрувета и спуштете ја пловичката. Одозгора истурете слој масло од вазелин висок 1 cm. Стерилизирајте 15 минути на притисок од 0,1 MPa 2 пати во интервали од 30 мин.

Медиум за одгледување термофилни анаероби кои произведуваат водород сулфид

Составот на медиумот вклучува, g/l: пептон 10, железен сулфат 1, агар 20. Пред полнење, во секоја епрувета се става чист железен клинец. По засејувањето на шеќерот, во епрувета се истура слој од стерилен вазелин. Ако шеќерот содржи бактерии кои произведуваат водород сулфид, во агарот се формираат карактеристични црни колонии.